[發(fā)明專利]一種用于鹽酸克倫特羅的可視化檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711203541.4
• 申請日: 2017-11-27
• 公開（公告）號: CN107703137B
• 公開（公告）日: 2020-06-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 譚貴良;李向麗;劉妍;劉子雄;王乾蕾
• 申請（專利權(quán)）人: 譚貴良;中山市食品藥品檢驗所
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78
• 代理公司: 中山馳鼎專利商標代理事務(wù)所(普通合伙) 44706
• 代理人: 凌信景

本發(fā)明公開了一種用于鹽酸克倫特羅的可視化檢測方法，用檸檬酸鈉還原法制得(15±3)nm的金顆粒，再分別將巰基化鹽酸克倫特羅適配體、巰基化鹽酸克倫特羅適配體互補寡核苷酸單鏈與金納米顆粒連接形成兩種探針，將這兩種探針與待測物按一定比例混勻，加熱后孵育50分鐘，再加入鹽溶液，反應(yīng)4～5分鐘；靶標的加入會破壞DNA對金納米顆粒的保護作用，隨著靶標濃度的增大，納米金顆粒在高鹽環(huán)境下會發(fā)生聚集，溶液的顏色紅色變淺，導(dǎo)致吸收峰變寬并紅移至540nm左右，此時在540nm進行UV?vis掃描，即可實現(xiàn)對待測物中鹽酸克倫特羅的檢測，為此，本發(fā)明具有靈敏度高、快速簡便的優(yōu)點，檢測限可達1ng/mL。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物檢測方法，具體涉及一種用于鹽酸克倫特羅的可視化檢測方法。

背景技術(shù)

鹽酸克倫特羅俗稱瘦肉精，為白色結(jié)晶性粉末，可促進動物生長，改善動物體內(nèi)脂肪分配，增加瘦肉率；其易被動物吸收，在動物體內(nèi)殘留時間長，容易蓄積。人類食用含有鹽酸克倫特羅的肉后會出現(xiàn)心跳過快、四肢肌肉顫動等中毒癥狀。由于一般的烹調(diào)方法不能將豬臟器和肉中殘留的“瘦肉精”的毒性破壞或損耗，以致殘留的鹽酸克倫特羅超量而引起的食物中毒事件屢有發(fā)生。因此，做好鹽酸克倫特羅的分析檢測工作，對保護人體健康具有重要意義。

目前，已經(jīng)有多種技術(shù)可以對鹽酸克倫特羅進行檢測。主要有色譜技術(shù)，包括高效液相色譜(HPLC)、氣相色譜、凝膠滲透色譜等；波譜與色譜聯(lián)用技術(shù)，如氣相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(GC-MS)、液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(LC-MS)；電化學(xué)技術(shù)，包括修飾電極技術(shù)、生物傳感器技術(shù)(BS)、高效毛細管電泳(CE)等；免疫分析技術(shù)，包括放射免疫分析技術(shù)(RIA)、酶聯(lián)免疫技術(shù)(EIA)、滴金免疫技術(shù)(DIGFA)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種用于鹽酸克倫特羅的可視化檢測方法，其基于納米金標記、適配體進行識別，可對待測物實現(xiàn)可視化、快速且靈敏地檢測是否含有鹽酸克倫特羅，該方法具有步驟操作簡便、高效的特點。

為解決以上技術(shù)問題，本發(fā)明一種用于鹽酸克倫特羅的可視化檢測方法,包括：

A、用檸檬酸鈉還原法制得納米金顆粒，粒徑(15±3)nm；

B、分別將巰基化鹽酸克倫特羅適配體DNA₁、巰基化鹽酸克倫特羅適配體互補寡核苷酸單鏈DNA₂與金納米顆粒連接形成兩種探針，即為鹽酸克倫特羅適配體探針和鹽酸克倫特羅適配體互補寡核苷酸單鏈探針；

C、將上述兩種探針與待測物按一定比例混勻，加熱后孵育1小時后，再加入鹽溶液，反應(yīng)4～5分鐘，由于靶標的加入會破壞DNA₁和DNA₂對金納米顆粒的保護作用，且隨著靶標濃度的增大，納米金顆粒在高鹽環(huán)境下會發(fā)生聚集，溶液的顏色由紅色變淺，或由紅色變?yōu)樽仙蛴杉t變?yōu)樗{紫色，使吸收峰變寬并紅移至540nm，此時在540nm進行UV-vis掃描，即可實現(xiàn)對待測物中鹽酸克倫特羅的檢測。

步驟B中鹽酸克倫特羅適配體DNA₁序列為：5’SH-AGC AGC ACAGAG GTC AGA TGTCAT CTG AAG TGA ATG AAG GTAAAC ATT ATT TCA TTA ACACCT ATG CGT GCT ACC GTG AA-3’；鹽酸克倫特羅適配體互補寡核苷酸單鏈DNA₂序列為：5’SH-TTC ACG GTAGCACGC ATAGGTGTT AAT GAA ATAATG TTT A-3’。