[發明專利]一種用于鹽酸克倫特羅的可視化檢測方法

有效

• 申請號: 201711203541.4
• 申請日: 2017-11-27
• 公開（公告）號: CN107703137B
• 公開（公告）日: 2020-06-23
• 發明（設計）人: 譚貴良;李向麗;劉妍;劉子雄;王乾蕾
• 申請（專利權）人: 譚貴良;中山市食品藥品檢驗所
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78
• 代理公司: 中山馳鼎專利商標代理事務所(普通合伙) 44706
• 代理人: 凌信景

1.一種用于鹽酸克倫特羅的可視化檢測方法，其特征在于包括：

A、用檸檬酸鈉還原法制得納米金顆粒，粒徑(15±3)nm；

B、分別將巰基化鹽酸克倫特羅適配體DNA₁、巰基化鹽酸克倫特羅適配體互補寡核苷酸單鏈DNA₂與金納米顆粒連接形成兩種探針，即為鹽酸克倫特羅適配體探針和鹽酸克倫特羅適配體互補寡核苷酸單鏈探針；

C、將上述兩種探針與待測物按一定比例混勻，加熱后孵育50分鐘后，再加入鹽溶液，反應4～5分鐘，由于靶標的加入會破壞DNA₁和DNA₂對金納米顆粒的保護作用，且隨著靶標濃度的增大，納米金顆粒在高鹽環境下會發生聚集，溶液的顏色由紅色變淺，或由紅色變為紫色，或由紅變為藍紫色，使吸收峰變寬并紅移至540nm，此時在540nm進行UV-vis掃描，即可實現對待測物中鹽酸克倫特羅的檢測；

步驟B中鹽酸克倫特羅適配體DNA₁序列為：5’SH-AGC AGC ACA GAG GTC AGA TGT CATCTG AAG TGA ATG AAG GTA AAC ATT ATT TCA TTA ACA CCT ATG CGT GCT ACC GTG AA-3’；鹽酸克倫特羅適配體互補寡核苷酸單鏈DNA₂序列為：5’SH-TTC ACG GTA GCA CGC ATAGGT GTT AAT GAA ATA ATG TTT A-3’；

步驟B中制備鹽酸克倫特羅適配體探針和鹽酸克倫特羅適配體互補寡核苷酸單鏈探針時，DNA₁和DNA₂兩條序列分別與1mmol/L的TCEP混合靜置30～40分鐘，再在35～40℃下與納米金混合，并在搖床孵育10～15小時，然后再將混合液在35～40℃下陳化10～15小時，并在這個過程中分多次加入NaCl，使NaCl溶液的最終濃度達到0.03～0.06mol/L。