[發明專利]一種旱地木槿種子無菌萌發與快速繁殖方法

有效

• 申請號: 201711191986.5
• 申請日: 2017-11-24
• 公開（公告）號: CN107896990B
• 公開（公告）日: 2020-04-21
• 發明（設計）人: 羅桂芬;陳高;孫衛邦
• 申請（專利權）人: 中國科學院昆明植物研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01C1/00;A01C1/08;A01G24/15;A01G24/12;A01G17/00
• 代理公司: 昆明協立知識產權代理事務所(普通合伙) 53108
• 代理人: 旃習涵

一種旱地木槿Hibiscus aridicola Anthony種子無菌萌發與快速繁殖的方法。以旱地木槿成熟種子為外植體，通過外植體消毒、種子無菌萌發、增殖與生根一系列培養步驟，有效解決了旱地木槿人工繁殖、引種馴化及其在園林園藝景觀上的開發利用，同時有效避免野生資源過度利用所造成的自然植株量減少與自然植被區遭受破壞的問題，在開發利用方面具有重要意義。本發明提供的方法，種子20天開始萌發，無菌萌發率60％，繁殖周期30天，增殖系數為5，生根率為98％，移栽成活率95％，極大地提高了旱地木槿的繁殖數量與生長速率，為該物種的引種馴化及園藝開發、保存和規模化生產提供了技術支持。

技術領域

本發明涉及生物技術中植物種子無菌萌發與快速繁殖方法，具體地說涉及到旱地木槿種子無菌萌發與快速繁殖方法。

背景技術

旱地木槿Hibiscus aridicola Anthony是隸屬于錦葵科木槿屬的美麗多花小灌木。旱地木槿是金沙江干熱河谷特有種和地區標志種，僅分布于云南麗江和四川鹽邊地區，海拔高600-2500米的干熱和干暖河谷中。由于分布點少于5個，種群持續衰退，2004年被列入《中國物種紅色名錄》瀕危種類[EN B2ab(ii)]。近年來，由于大壩建設，生境喪失，及人類活動的影響，該物種的生存環境受到嚴重威脅。

目前，生物技術中的無菌快速繁殖已成為中藥材、花卉、瀕危物種、經濟林果等種苗生產的重要手段。

迄今為止，現有技術中未見有旱地木槿種子無菌萌發與快速繁殖方面的報道。

發明內容

本發明的目的是提供旱地木槿種子無菌萌發與快速繁殖的方法，填補旱地木槿繁殖在生物技術上的空白，同時解決旱地木槿在野外分布區域狹窄，引種馴化難度大的問題。本發明為旱地木槿全面的開發和持續利用奠定了種苗繁育基礎。

為了實現本發明的目的，本發明提供了如下的技術方案：

一種旱地木槿種子無菌萌發與快速繁殖的方法，該方法包括外植體選擇與消毒、種子無菌萌發培養、增殖與繼代培養、壯苗與生根培養、瓶苗移栽步驟，

所述外植體選擇與消毒是取旱地木槿略泛黃的飽滿果實，用1％肥皂水浸泡10分鐘，經流水沖洗干凈后進行組培常規外植體消毒；

所述種子無菌萌發培養是：在種子無菌萌發培養基中暗培養7天后進行光照，光照強度為1000LUX，溫度為23～30℃，種子無菌萌發培養基為改良的MS培養基，將NH₄NO₃1650mg/L減少為400mg/L，KNO₃由1900mg/L減少為450mg/L，不加其他有機物，其余元素不變，20天后，種子開始萌發；

所述的增殖與繼代培養是在增殖與繼代培養基中培養，增殖與繼代培養基為MS培養基+0.5mg/L 6-BA+0.5mg/L IAA+蔗糖30g/L+瓊脂5g/L，pH5.8，培養周期為30天；

所述的壯苗與生根培養是在壯苗與生根培養基中培養，壯苗與生根培養基為MS培養基+0.3mg/LNAA+0.3mg/L IAA+蔗糖30g/L+瓊脂5g/L，pH5.8，培養周期20天；

所述的瓶苗移栽是：將生根瓶苗提前一周置放于大棚煉苗，準備基質，基質為體積比的珍珠巖∶腐殖土∶生紅土＝1∶2∶3，用800倍多菌靈進行噴施拌土，用塑料膜密封消毒7天，調節pH至5.8，開瓶取苗，洗凈基部培養基，移栽，及時噴水并覆蓋塑料膜保濕，大棚溫度為20～30℃，空氣濕度50～60％，基質濕度75～85％。

根據所述的旱地木槿種子無菌萌發與快速繁殖方法，所述外植體選擇與消毒是取旱地木槿略泛黃的飽滿果實為外植體，用1％肥皂水浸泡10min，經流水沖洗干凈后，拿到超凈臺上，用75％的酒精消毒15min，無菌水沖洗3遍后，去掉果皮，取出種子，用0.1％升汞溶液進行表面消毒5min，無菌水清洗3～5次，接種于準備好的旱地木槿種子萌發培養基中，每瓶5粒。