[發明專利]基于膠乳增強免疫比濁法測定Lp-PLA2的試劑盒及其制備方法

在審

• 申請號: 201711190758.6
• 申請日: 2017-11-24
• 公開（公告）號: CN108008130A
• 公開（公告）日: 2018-05-08
• 發明（設計）人: 盧岳軍;陳雪;仇家舟;王朝陽;陳晶晶
• 申請（專利權）人: 海格德生物科技（深圳）有限公司
• 主分類號: G01N33/573
• 分類號: G01N33/573;G01N33/531
• 代理公司: 廣東前海律師事務所 44323
• 代理人: 張紹波;何凱威

本發明提供一種基于膠乳增強免疫比濁法測定Lp?PLA2的試劑盒及其制備方法，其中所述試劑盒包括反應液和膠乳抗體試劑，所述膠乳抗體試劑包括至少兩種通過單抗與膠乳微球偶聯而成的膠乳抗體。所述制備方法為：篩選出特異性較強的Lp?PLA2單抗，將多種單抗混合代替多抗進行膠乳偶聯，得到膠乳抗體，再配制反應液，最后將膠乳抗體和反應液組成試劑盒，用于測定Lp?PLA2的含量。通過本發明所述制備方法制備出的試劑盒，可以同時提高膠乳增強免疫比濁法測定Lp?PLA2時的靈敏度和特異性，使得試劑盒的線性范圍更寬，準確性更高，其具有極高的經濟價值和廣闊的市場應用前景。

技術領域

本發明涉及生物檢測試劑制備領域，尤其涉及一種基于膠乳增強免疫比濁法測定Lp-PLA2的試劑盒及其制備方法。

背景技術

心腦血管疾病是心臟血管和腦血管的疾病統稱，心腦血管疾病具有“發病率高、致殘率高、死亡率高、復發率高，并發癥多”即“四高一多”的特點。目前，國內外指南均建議采用傳統危險因素為基礎的模型預測動脈粥樣硬化性心血管疾病的短期和長期風險。但是，僅采用傳統危險因素仍存在不足。因此，生物標志物被認為是傳統危險評估的重要補充手段。

血漿脂蛋白相關磷脂酶A2(lipoprotein-associatedphospholipase A2，簡稱Lp-PLA2)是新近出現的一種具有強烈促炎癥作用的生物學標記物，可作為反映動脈粥樣硬化斑塊炎癥及血栓形成事件的高度準確的獨立風險因子，同時還可作為一種急性動脈粥樣硬化性血栓復發事件高風險患者的準確風險評估標志物。目前，已上市的Lp-PLA2測定試劑盒按檢測方法分類，主要是酶聯免疫法、酶法、免疫熒光層析法和膠乳免疫比濁法。上訴檢測方法中，酶聯免疫法的操作繁瑣，反應時間長(大于1.5小時)；酶法的靈敏度和特異性不高；免疫熒光層析法的精密度較差(CV>10％)，無法滿足醫院的檢測精密度高、自動化程度高、TAT時間短等需求。

而膠乳增強免疫比濁法可以應用于全自動生化分析儀，具有自動化程度高、操作簡便、檢測時間短等優點。但是，為了提升靈敏度，膠乳增強免疫比濁法一般采用多抗進行標記，特異性不強，也即檢測結果的準確性不高，嚴重阻礙了該方法的推廣。

發明內容

本發明的目的在于提供一種基于膠乳增強免疫比濁法測定Lp-PLA2的試劑盒及其制備方法，旨在解決現有技術中采用膠乳增強免疫比濁法測定Lp-PLA2時特異性較差和靈敏度不高的問題。

本發明的技術方案包括：

一種基于膠乳增強免疫比濁法測定Lp-PLA2的試劑盒，包括：反應液和膠乳抗體試劑；其中，所述反應液包括緩沖液、無機鹽、增濁劑和防腐劑中的一種或幾種；所述膠乳抗體試劑包括至少兩種通過單抗與膠乳微球偶聯而成的膠乳抗體。

所述基于膠乳增強免疫比濁法測定Lp-PLA2的試劑盒，其中，在反應液中，所述緩沖液包括磷酸鹽緩沖液、甘氨酸-氫氧化鈉緩沖液、三羥甲基氨基甲烷緩沖液或4-羥乙基哌嗪乙磺酸緩沖液中的任一種；所述無機鹽包括氯化鈉、氯化鉀、氯化鎂、硫酸鈉和/或硫酸鎂中的一種或幾種；所述增濁劑包括聚乙二醇2000、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000和/或聚乙二醇8000中的一種或幾種；所述防腐劑包括Proclin300或疊氮鈉中的任一種。

所述基于膠乳增強免疫比濁法測定Lp-PLA2的試劑盒，其中，所述膠乳微球的粒徑范圍為50-300nm。

一種基于膠乳增強免疫比濁法測定Lp-PLA2的試劑盒的制備方法，其中，包括以下步驟：

A、量取固含量為10％的膠乳微球，加至緩沖液中，離心，去上清，用緩沖液對膠乳微球沉淀物重懸，加入碳二亞胺和N-羥基丁二酰亞胺，活化；再次離心，去上清，用緩沖液對膠乳微球沉淀物重懸，制得活化后的膠乳微球；

B、取至少兩種單抗，并進行混合，制得含有多種單抗的抗體；