[發明專利]基于膠乳增強免疫比濁法測定Lp-PLA2的試劑盒及其制備方法

在審

• 申請號: 201711190758.6
• 申請日: 2017-11-24
• 公開（公告）號: CN108008130A
• 公開（公告）日: 2018-05-08
• 發明（設計）人: 盧岳軍;陳雪;仇家舟;王朝陽;陳晶晶
• 申請（專利權）人: 海格德生物科技（深圳）有限公司
• 主分類號: G01N33/573
• 分類號: G01N33/573;G01N33/531
• 代理公司: 廣東前海律師事務所 44323
• 代理人: 張紹波;何凱威

1.一種基于膠乳增強免疫比濁法測定Lp-PLA2的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括：

反應液和膠乳抗體試劑；

其中，所述反應液包括緩沖液、無機鹽、增濁劑和防腐劑中的一種或幾種；所述膠乳抗體試劑包括至少兩種通過單抗混合后與膠乳微球偶聯而成的膠乳抗體。

2.根據權利要求1所述基于膠乳增強免疫比濁法測定Lp-PLA2的試劑盒，其特征在于，在反應液中，所述緩沖液包括磷酸鹽緩沖液、甘氨酸-氫氧化鈉緩沖液、三羥甲基氨基甲烷緩沖液或4-羥乙基哌嗪乙磺酸緩沖液中的任一種；所述無機鹽包括氯化鈉、氯化鉀、氯化鎂、硫酸鈉和/或硫酸鎂中的一種或幾種；所述增濁劑包括聚乙二醇2000、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000和/或聚乙二醇8000中的一種或幾種。

3.根據權利要求1所述基于膠乳增強免疫比濁法測定Lp-PLA2的試劑盒，其特征在于，所述膠乳微球的粒徑范圍為50-300nm。

4.一種基于膠乳增強免疫比濁法測定Lp-PLA2的試劑盒的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

A、量取固含量為10％的膠乳微球，加至緩沖液中，離心，去上清，用緩沖液對膠乳微球沉淀物重懸，加入碳二亞胺和N-羥基丁二酰亞胺，活化；再次離心，去上清，用緩沖液對膠乳微球沉淀物重懸，制得活化后的膠乳微球；

B、取至少兩種單抗，并進行混合，制得含有多種單抗的抗體；

C、將上述制得的膠乳微球和抗體按特定比例混合均勻，并進行偶聯，制得偶聯后的膠乳抗體；

D、向膠乳抗體中加入封閉液進行封閉，再進行離心，去上清，用保存液對膠乳抗體沉淀物進行重懸，制得膠乳抗體試劑；

E、稱取緩沖液、無機鹽、增濁劑和防腐劑，制得反應液，并將反應液和膠乳抗體試劑組成用于測定Lp-PLA2含量的試劑盒。

5.根據權利要求4所述基于膠乳增強免疫比濁法測定Lp-PLA2的試劑盒的制備方法，其特征在于，在步驟A，所述緩沖液包括磷酸鹽緩沖液、甘氨酸-氫氧化鈉緩沖液、三羥甲基氨基甲烷緩沖液或4-羥乙基哌嗪乙磺酸緩沖液中的任一種。

6.根據權利要求4所述基于膠乳增強免疫比濁法測定Lp-PLA2的試劑盒的制備方法，其特征在于，在步驟D中，所述封閉液包括小牛血清白蛋白、明膠和/或酪蛋白中一種或幾種。

7.根據權利要求5所述基于膠乳增強免疫比濁法測定Lp-PLA2的試劑盒的制備方法，其特征在于，在步驟D中，所述保存液包括緩沖液、賦形劑、穩定劑、表面活性劑和防腐劑；其中，所述賦形劑包括海藻糖、蔗糖、麥芽糖和/或甘露醇中的一種或者幾種；所述穩定劑包括小牛血清白蛋白、明膠和/或酪蛋白中的一種或幾種；所述表面活性劑包括吐溫-20、曲拉通X-100和/或十六烷基-3-甲基氯化銨中的一種或幾種；所述防腐劑包括Proclin300和/或疊氮鈉中的一種或幾種。

8.根據權利要求4所述基于膠乳增強免疫比濁法測定Lp-PLA2的試劑盒的制備方法，其特征在于，在步驟D中，所述反應液中，所述緩沖液包括磷酸鹽緩沖液、甘氨酸-氫氧化鈉緩沖液、三羥甲基氨基甲烷緩沖液或4-羥乙基哌嗪乙磺酸緩沖液中的任一種；所述無機鹽包括氯化鈉、氯化鉀、氯化鎂、硫酸鈉和/或硫酸鎂中的一種或幾種；所述增濁劑包括聚乙二醇2000、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000和/或聚乙二醇8000中的一種或幾種；所述防腐劑包括Proclin300或疊氮鈉中的任一種。

9.根據權利要求4所述基于膠乳增強免疫比濁法測定Lp-PLA2的試劑盒的制備方法，其特征在于，在步驟C中，不同的單抗，其特定比例有所不同。