[發(fā)明專利]一種檢測谷胱甘肽探針試劑盒及其檢測方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201711180319.7 | 申請日： | 2017-11-23 |
| 公開（公告）號： | CN107907515A | 公開（公告）日： | 2018-04-13 |
| 發(fā)明（設計）人： | 王穎皓 | 申請（專利權(quán)）人： | 王穎皓 |
| 主分類號： | G01N21/64 | 分類號： | G01N21/64;G01N33/68 |
| 代理公司： | 南寧深之意專利代理事務所(特殊普通合伙)45123 | 代理人： | 徐國華 |
| 地址： | 530000 廣西*** | 國省代碼： | 廣西;45 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 檢測 谷胱甘肽 探針 試劑盒 及其 方法 | ||
1.一種檢測谷胱甘肽探針試劑盒，其特征在于，主要成分包括：含NH4Cl、Tris、EDTA-Na2的紅細胞裂解液；含 MgCl2的0.2M磷酸緩沖液；谷胱甘肽標準品；谷胱甘肽核酸適體熒光探針；所述谷胱甘肽核酸適體熒光探針為5'和3'兩端分別標記熒光芘分子單體的核苷酸單鏈，該核苷酸單鏈序列為：ggtggaggca agagatcggc cgaggttttc。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測谷胱甘肽探針試劑盒，其特征在于，所述含NH4Cl、Tris、EDTA-Na2的紅細胞裂解液為含有1～280 mmol/L NH4Cl, 1~34 mmol/L Tris,1~2mmol/LEDTA-Na2, pH 7.0~7.2；所述含 MgCl2的0.2M磷酸緩沖液為含有1~10mmol/L MgCl2。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的檢測谷胱甘肽探針試劑盒，其特征在于，所述含NH4Cl、Tris、EDTA-Na2的紅細胞裂解液、含 MgCl2的0.2M磷酸緩沖液、谷胱甘肽標準品、谷胱甘肽核酸適體熒光探針為配制好直接使用的液體試劑或是使用前需加水溶解的干粉狀態(tài)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的檢測谷胱甘肽探針試劑盒，其特征在于，該試劑盒用于檢測肝素抗凝全血或末梢血中的谷胱甘肽濃度。
5.一種用權(quán)利1~3任一所述檢測谷胱甘肽探針試劑盒來檢測谷胱甘肽濃度的方法，其特征在于，方法步驟包括：
（1）血樣裂解：將血樣和含NH4Cl、Tris、EDTA-Na2的紅細胞裂解液按1:0.5~5體積比混勻，靜置5~30min，再中速離心5~10min，收集上清液；
（2）混合卵育：取20~100μl步驟1）得到的上清液和30~50ul的用含 MgCl2的0.2M磷酸緩沖液，溶解谷胱甘肽核酸適體熒光探針得到的谷胱甘肽核酸適體熒光探針試劑混合，室溫下卵育5~15min，使谷胱甘肽核酸適體熒光探針與血樣充分結(jié)合，得到測試液；
（3）熒光檢測：熒光檢測儀檢測步驟2）得到的測試液50ul，在熒光檢測儀熒光激發(fā)后，讀取熒光激發(fā)后20至100ns時間段內(nèi)波長在480~500nm的熒光值；
（4）結(jié)果計算：使用生物醫(yī)學作圖軟件，參照谷胱甘肽標準樣品制作的標準曲線，結(jié)合步驟3）中檢測到的熒光值計算出血樣中谷胱甘肽的濃度。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種用檢測谷胱甘肽探針試劑盒來檢測谷胱甘肽濃度的方法，其特征在于，所述谷胱甘肽核酸適體熒光探針試劑中谷胱甘肽核酸適體熒光探針濃度為200~400 nmol/L，所述谷胱甘肽核酸適體熒光探針為5'和3'兩端分別標記熒光芘分子單體的核苷酸單鏈，該核苷酸單鏈序列為：ggtggaggca agagatcggc cgaggttttc。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種用檢測谷胱甘肽探針試劑盒來檢測谷胱甘肽濃度的方法，其特征在于，所述的谷胱甘肽核酸適體熒光探針不與谷胱甘肽結(jié)合時，核酸適體處于比較松散的結(jié)構(gòu)，5'和3'兩端的芘分子單體相互游離, 熒光激發(fā)后發(fā)射波長在 370~ 400nm 之間；所述的谷胱甘肽核酸適體熒光探針與谷胱甘肽結(jié)合時，谷胱甘肽誘導其發(fā)生結(jié)構(gòu)改變，核酸適體5'和3'兩端的芘分子單體相互靠近，形成激發(fā)態(tài)二聚體，熒光激發(fā)后激發(fā)態(tài)二聚體發(fā)射波長在 480 到 500nm之間。
8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種用檢測谷胱甘肽探針試劑盒來檢測谷胱甘肽濃度的方法，其特征在于，所述的血樣為肝素抗凝全血或末梢血，所述含NH4Cl、Tris、EDTA-Na2的紅細胞裂解液為含有1~280 mmol/L NH4Cl, 1~34 mmol/L Tris,1~2mmol/LEDTA-Na2, pH 7.0~7.2；所述含 MgCl2的0.2M磷酸緩沖液為含有1~10mmol/L MgCl2；所述熒光檢測儀為具有時間分辨熒光測定的熒光檢測儀。
9.根據(jù)權(quán)利要求5~7所述的一種用檢測谷胱甘肽探針試劑盒來檢測谷胱甘肽濃度的方法，其特征在于，該檢測方法用于檢測肝素抗凝全血或末梢血中的谷胱甘肽濃度。
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