[發明專利]誘導胚性愈傷組織的方法

有效

• 申請號: 201711176722.2
• 申請日: 2017-11-22
• 公開（公告）號: CN107853178B
• 公開（公告）日: 2020-07-28
• 發明（設計）人: 張魯斌;孫曼麗;宋康華;賈志偉
• 申請（專利權）人: 中國熱帶農業科學院南亞熱帶作物研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京工信聯合知識產權代理有限公司 11266
• 代理人: 郭一斐

本發明涉及一種誘導胚性愈傷組織的方法，包括以下步驟：用滅菌試劑對種子進行滅菌；用滅菌后的種子作為誘導愈傷的材料，接種于誘導愈傷組織的第一培養基上，并進行光照培養；將光照培養后的愈傷組織轉移至第二培養基上進行繼代培養，獲得胚性愈傷組織。該方法簡單易行，能夠高效獲得大量胚性愈傷組織。

技術領域

本發明涉及一種誘導胚性愈傷組織的方法，特別是用于菜心種子的快速誘導胚性愈傷組織的方法。

背景技術

菜心(BrassicacampestrisL.ssp.chinensisvar.utilisTsenetLee)為十字花科蕓薹屬特產蔬菜，以花苔為食，是我國華南地區蔬菜作物的重要組成部分，目前在全國普遍種植，并遠銷港澳、東南亞各國。菜心生長周期短，容易種植，已成為科研的重要材料。當前菜心遺傳轉化的主要手段是通過農桿菌侵染子葉或花穗，這些方法存在菜心轉化率低，轉基因不穩的問題。當前尚沒有任何關于菜心愈傷的誘導技術和操作方法。因此，提供一種簡便、可操作的菜心胚性愈傷組織誘導技術具有重要的現實意義。

發明內容

基于以上現有技術的問題，本發明提供了一種誘導胚性愈傷組織的方法，通過采用滅菌、光照培養和繼代培養來快速高效地大量獲得胚性愈傷組織。

根據本發明的一個方面，提供一種誘導胚性愈傷組織的方法，包括以下步驟：

用滅菌試劑對種子進行滅菌；

用滅菌后的種子作為誘導愈傷的材料，接種于誘導愈傷組織的第一培養基上，并進行光照培養；

將光照培養后的愈傷組織轉移至第二培養基上進行繼代培養，獲得胚性愈傷組織。

根據一個實施方式，所述滅菌步驟包括依次用70％v/v乙醇和1.5wt％次氯酸鈉水溶液處理所述種子。

優選地，所述光照培養進行12～16天。

根據本發明的另一個實施方式，所述繼代培養為每10天繼代一次，連續繼代至少3次。

根據本發明的又一個實施方式，所述第一培養基和所述第二培養基獨立地為MS(Murashig和Skoog培養基)+2.0mg/L6-BA(6-Benzylaminopurine，6-芐氨基嘌呤)+0.5～1.0mg/LNAA(1-Naphthaleneaceticacid，萘乙酸)+4.0mg/LAgNO₃+6～8g/L(相當于質量體積比為0.6～0.8％)瓊脂粉+25～30g/L(相當于質量體積比為2.5～3％)蔗糖。

優選地，所述第一培養基和所述第二培養基的pH分別為5.7～5.8。

具體地，所述光照培養和所述繼代培養的每日光照條件分別為14小時光照后，繼續10小時黑暗，光照強度在1000～2000勒克斯之間，溫度為20～25℃。

根據本發明的又一個實施方式，在滅菌步驟之后、光照培養步驟之前，用無菌去離子水清洗滅菌后的種子1至2次。

優選地，所述種子為菜心種子。

本發明與現有技術相比，具有優點如下：

1、首次成功誘導了菜心胚性愈傷組織，用本方法胚性愈傷獲得率在90％以上。

2、以無菌的菜心種子作為愈傷誘導材料，簡單方便，避免了種植無菌苗，再以無菌苗的葉為侵染受體的繁瑣程序。

3、光照培養與繼代培養所用培養基一致，且在相同環境中進行，誘導愈傷組織效果良好，簡單、易行、高效地獲得了胚性愈傷組織。

附圖說明

圖1示出了在實施例1中根據本發明的誘導胚性愈傷組織的方法對菜心種子進行光照培養14天后所得的菜心愈傷組織。