[發明專利]銹色棕櫚象甲特異性引物及快速分子檢測方法

有效

• 申請號: 201711173881.7
• 申請日: 2017-11-22
• 公開（公告）號: CN107904315B
• 公開（公告）日: 2021-01-15
• 發明（設計）人: 宗世祥;陶靜;駱有慶;任利利;閻偉
• 申請（專利權）人: 北京林業大學
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;陳征

本發明提供了銹色棕櫚象甲特異性引物及快速分子檢測方法。本發明通過分析銹色棕櫚象甲線粒體COI基因，設計了特異性引物對，所述特異性引物對核苷酸序列分別見序列表SEQ ID No.1?2和SEQ ID No.3?4所示。本發明的銹色棕櫚象甲快速分子檢測方法，是以樣品總DNA為模板，利用上述兩對引物的任一對進行PCR擴增，根據瓊脂糖電泳判定結果。本發明引物特異性好，檢測方法快速簡單，準確性高，靈敏度好，為銹色棕櫚象甲的鑒定提供了檢測方法。

技術領域

本發明涉及生物檢測鑒定技術，具體地說涉及對銹色棕櫚象甲進行PCR鑒定用引物及使用該引物對銹色棕櫚象甲進行的PCR鑒定方法。

背景技術

隨著全球經濟一體化的加快，林業外來生物入侵的形勢日趨嚴峻。一些重大林業入侵物種已對我國的森林資源、物種多樣性與生態安全造成了重大損失。

銹色棕櫚象甲Rhynchophorus ferrugineus(Oliver)屬鞘翅目Coleoptera象甲科Curculionidae隱頦象亞科Rynchoporinae棕櫚象屬Rhynchophorus，又稱紅棕象甲、椰子隱喙象、椰子甲蟲、亞洲棕櫚象甲、印度銹色棕櫚象甲，被列入我國進境植物檢疫性有害生物名錄和林業檢疫性有害生物名錄。銹色棕櫚象甲主要在棕櫚植物葉柄基部和生長點附近的干部危害，其危害主要發生在幼蟲期。幼蟲鉆進樹干內取食莖桿疏導組織，致使樹干成空殼，樹勢漸衰弱，易受風折。由于幼蟲在樹干內危害，初期受害不易發現，一旦發現，受害植株多無法挽救，而油棕、椰子等棕櫚植物成林時間較長，一旦死亡，損失較大。

銹色棕櫚象甲原產南亞和東南亞，1906年作為椰子Cocos nucifera的主要害蟲在印度被報道，1920年在伊拉克發現，直到20世紀80年代中期銹色棕櫚象甲作為海棗PhoenixSpp.的主要害蟲在中東地區大面積暴發，此后逐漸由北非向歐洲蔓延，90年代末幾乎使地中海沿岸國家和地區的油棕Elaeis guineensis全部死亡。現已廣泛分布于全球，包括以色列、科威特、埃及、法國、葡萄牙、巴基斯坦、菲律賓、日本、澳大利亞、墨西哥等40多個國家和地區。我國于20世紀90年代在福建(廈門)首次發現銹色棕櫚象甲，隨后廣東、廣西(1997)、海南(2000)、云南(2000)、上海(2003)、浙江(2007)、重慶(2008)、貴州(2010)。目前，包括西藏(墨脫)在內我國已有13個省市自治區不同程度地受到銹色棕櫚象甲的危害。主要危害樹種有油棕、椰子、加拿利海棗Phoenix canariensis、檳榔Areca catechu、糖棕Borassusflabellifer、霸王棕Bismarckia nobilis、等30余種棕櫚科植物及甘蔗Saccharum sp.。

銹色棕櫚象甲對3-15年生棕櫚植物危害較重，較少危害30-50年生的老樹。成蟲喜產卵于植株幼嫩組織傷口上，幼蟲孵化后從樹冠受害部位侵入樹體，而不從樹干的受傷部位侵入。銹色棕櫚象甲早期危害很難被察覺，后期被害樹與健康樹有明顯差異，受害樹中心葉片干枯，葉子減少，倒披下來，當移開枯死的葉柄，能看到銹色棕櫚象甲結的繭，剝開表皮可看到幼蟲鉆蛀的坑道。受害嚴重的植株，心葉枯萎，生長點死亡，只剩下數片老葉，此時植株難以挽救，有的樹干甚至被蛀食中空，只剩下空殼。銹色棕櫚象甲的危害，不僅給國民經濟造成巨大損失，也破壞了自然景觀及生態環境，成為綠色棕櫚植物資源的一大“殺手”，對我國豐富的熱帶木本糧油樹種資源及產業構成嚴重威脅。

植物檢疫，是防止外來有害生物入侵和擴散的最有效的手段。近年來，我國在棕櫚科苗木調運中不斷截獲銹色棕櫚象甲。為了將銹色棕櫚象甲和國內常見象甲類昆蟲區分開來，需要大量形態學鑒別工作，這些工作大多費時、費力且需要專業的昆蟲分類學知識。并且，處于卵、幼蟲、蛹這三個蟲態的象甲類昆蟲在形態上非常相似，只能在獲取到成蟲樣本的時候才能進行，處于卵、幼蟲、蛹這三個蟲態的象甲類昆蟲在形態上非常相似，目前還沒有可靠的鑒定特征。