[發明專利]靶向動脈粥樣硬化病灶的細胞膜仿生遞藥系統的制備方法及其產品和應用

在審

• 申請號: 201711173732.0
• 申請日: 2017-11-22
• 公開（公告）號: CN107961229A
• 公開（公告）日: 2018-04-27
• 發明（設計）人: 李翀;程立婷
• 申請（專利權）人: 西南大學
• 主分類號: A61K9/51
• 分類號: A61K9/51;A61K47/34;A61K47/46;A61P9/10;C12N5/0786
• 代理公司: 北京同恒源知識產權代理有限公司11275
• 代理人: 趙榮之

技術領域

本發明屬于藥學領域，涉及靶向動脈粥樣硬化病灶的細胞膜仿生遞藥的制備方法，還涉及由該方法制得的產品和應用。

背景技術

動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)是一種嚴重危害人類健康的常見病，是冠心病、腦梗死、外周血管病等缺血性心腦血管病的主要病理基礎。迄今為止，AS的發病機制尚未完全闡明，存在多種學說，在這些學說中，炎癥學說是最受認可的學說之一。該學說認為各種危險因素造成的動脈內膜損傷是動脈粥樣硬化的始動環節。在這一過程中，活化的血管內皮細胞分泌一些粘附分子，如血管細胞粘附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1，VCAM-1)、細胞間黏附分子-1(inter cellular adhesion molecule-1，ICAM-1)等。這些粘附分子介導了內皮細胞與白細胞、血小板間的起始黏附，促進單核細胞在組織中的游走，增加與細胞間的相互作用，促使病損進一步發展，最終形成動脈粥樣硬化斑塊。

研究表明，巨噬細胞參與了動脈粥樣硬化病理進程中的多個重要環節。在AS起始過程中，巨噬細胞集落刺激因子(macrophage colony stimulating factor，M-CSF)以及其他的分化因子驅使單核細胞分化成巨噬細胞；而在AS發展進程中，巨噬細胞促進斑塊的形成、稀釋纖維帽和壞死核心成分，由此導致炎性應答的增加和斑塊內白細胞等凋亡信號的增強。在AS 病理進程中，巨噬細胞膜表面蛋白發揮著重要作用。研究表明，巨噬細胞表面已知的蛋白大概有1000多種，其中有458種是經GOA注釋的膜蛋白，包括CD11b、CD14、CD18、CD40、 CD86、CD44、CD16等，這些蛋白功能各異。如CD40可以通過與可溶性CD40配體(CD40 ligand，CD40L)結合，調節多種細胞因子、趨化因子、黏附分子和生長因子等的表達，促進 AS相關炎癥、免疫反應，誘導AS斑塊發生進展，增加斑塊的易損性；C-反應蛋白(c-reactive protein，CRP)可以促進VCAM-1、ICAM-1、E-選擇素以及單核細胞趨化蛋白(monocytes chemoattractant protein-1，MCP-1)的表達，促進炎癥反應的發生，是AS發展中的重要炎性標志物。

近年來，應用細胞膜包裹納米粒這一仿生策略在多種疾病的靶向遞藥研究中取得較大進展。細胞膜包裹納米粒是將細胞膜包覆在納米顆粒表面所制備而成的一種新型藥物遞送載體和仿生納米材料，將細胞膜與納米粒結合，不僅能增加納米粒的生物相容性，還可以通過選擇不同種類細胞的細胞膜，如血細胞、干細胞或細菌細胞等，使得納米粒“穿衣”后獲得原先細胞的部分功能。文獻報道，巨噬細胞膜包裹的仿生納米遞藥系統，已被用于構建靶向肺轉移乳腺癌的仿生遞藥系統，體現出用于病灶精準治療的良好潛力，但是未見巨噬細胞膜包裹的納米粒靶向動脈粥樣硬化病灶的報道。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的之一在于提供一種靶向動脈粥樣硬化病灶的細胞膜仿生遞藥系統的制備方法；本發明的目的之二在于提供由所述制備方法制得的細胞膜仿生遞藥系統；本發明的目的之三在于提供所述的細胞膜仿生遞藥系統在制備抗動脈粥樣硬化載藥系統中應用。

為達到上述目的，本發明提供如下技術方案：

靶向動脈粥樣硬化病灶的細胞膜仿生遞藥系統的制備方法，包括如下步驟：提取巨噬細胞膜，經反復擠壓制成巨噬細胞膜囊泡，然后與聚乳酸-羥基乙酸共聚物納米粒混合，過濾膜反復擠壓制成細胞膜仿生遞藥系統。

優選的，所述提取巨噬細胞膜的方法如下：收集巨噬細胞，加入4℃TM buffer重懸，調整細胞懸液濃度為2.5×10⁷/mL，用微型均質機來回擠壓破碎細胞膜20次，加入濃度為1 mol·L^-1的蔗糖與細胞勻漿混合，使蔗糖終濃度為0.25mol·L^-1，接著先在4℃、2000g離心10min，取上清液；再在4℃、3000g離心30min，棄去上清液；最后加入4℃含0.25mol·L^-1蔗糖TM buffer重懸，4℃，3000g離心30min，棄去上清液，管底沉淀物即為巨噬細胞膜，-20℃保存；所述TM buffer各組分如下：pH 7.4,0.01mol·L^-1Tris、0.001mol·L^-1MgCl。

優選的，所述巨噬細胞膜囊泡由巨噬細胞膜用微型均質機反復擠壓制成。