[發明專利]一種基于代謝途徑改造的生產2-酮基-L-古龍酸的方法有效
| 申請號： | 201711169537.0 | 申請日： | 2017-11-22 |
| 公開（公告）號： | CN109810975B | 公開（公告）日： | 2022-03-01 |
| 發明（設計）人： | 張怡軒;王彩云 | 申請（專利權）人： | 沈陽藥科大學 |
| 主分類號： | C12N15/11 | 分類號： | C12N15/11;C12N15/70;C12P7/60 |
| 代理公司： | 沈陽飛揚靈睿知識產權代理事務所(普通合伙) 21255 | 代理人： | 靳玲 |
| 地址： | 110016 遼*** | 國省代碼： | 遼寧;21 |
| 權利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 基于 代謝 途徑 改造 生產 酮基 古龍酸 方法 | ||
1.如SEQ ID No:1-4所示的核苷酸序列在提高酮古龍酸菌的2-酮基-L-古龍酸產量中的應用。
2.一種基于代謝途徑改造的生產2-酮基-L-古龍酸的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：
(1)根據酮古龍酸菌基因組序列，通過BPROM預測得到內源性啟動子p1和p2，序列分別如SEQ ID No:1和SEQ ID No:2所示；
(2)利用gfp基因作為報告基因，對啟動子活性進行鑒定；
(3)根據酮古龍酸菌密碼子偏愛性優化外源磷酸轉酮酶基因xfp和磷酸轉乙酰酶基因pta，優化后的片段分別為xfp2502和pta2145，序列分別如SEQ ID No:3和SEQ ID No:4所示；
(4)通過PCR擴增xfp2502、pta2145、p1和p2四個片段，再通過overlap PCR將p1和xfp2502、p2和pta2145片段連接起來得到p1xfp2502和p2pta2145兩個片段；
(5)將p1xfp2502和p2pta2145插入到pBBR1MCS-2質粒上，得到重組質粒pBBR-p1xfp2502-p2pta2145，
將重組質粒pBBR-p1xfp2502-p2pta2145電轉至
(6)通過接合轉移將重組質粒pBBR-p1xfp2502-p2pta2145從
(7)將步驟(6)中得到的重組酮古龍酸菌首先進行種子培養，然后進行發酵培養，實現2-酮基-L-古龍酸的高效生產。
3.如權利要求2所述的一種基于代謝途徑改造的生產2-酮基-L-古龍酸的方法，其特征在于，步驟(4)中PCR擴增酮古龍酸菌內源性啟動子p1和p2所用引物分別是：
p1F:
p1R:TGTCTTTTCCAGTATACGCGGACAC、
p2F:
p2R:GTGCGTCGTCACCTTTCGATC。
4.如權利要求2所述的一種基于代謝途徑改造的生產2-酮基-L-古龍酸的方法，其特征在于，步驟(4)中PCR擴增xfp2502和pta2145所用引物分別為：
xfp2502F:ATGTGCCGTTCGACCGGTG和
xfp2502R:AAGCTTAAAAAAAACCCCGCCCTGTCAGGGGCGGGGTTTTTTTTTTACTCGTTGTCGCCGGCCG、
pta2145F:
GATCGAAAGGTGACGACGCACGTCTCGCGTATCATCATGCTGATC和
pta2145R:
GCTCTAGAAAAAGGCCATCCGTCAGGATGGCCTTCTTTACTGCTGTTGGGCCGATTG。
5.如權利要求2所述的一種基于代謝途徑改造的生產2-酮基-L-古龍酸的方法，其特征在于，步驟(7)所述發酵培養的條件是：溫度28-32℃，搖床轉速為180-220rpm，發酵時間60-84h。
該專利技術資料僅供研究查看技術是否侵權等信息，商用須獲得專利權人授權。該專利全部權利屬于沈陽藥科大學，未經沈陽藥科大學許可，擅自商用是侵權行為。如果您想購買此專利、獲得商業授權和技術合作，請聯系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/201711169537.0/1.html，轉載請聲明來源鉆瓜專利網。
