[發(fā)明專利]油茶粕多肽在制備抗動脈粥樣硬化藥物中的應(yīng)用

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• 申請日: 2017-11-21
• 公開（公告）號: CN107898997A
• 公開（公告）日: 2018-04-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王烈峰;徐敏雯;侯志平;洪瑞云;寧慧婷;張毅;張曉麗;周敏
• 申請（專利權(quán)）人: 贛南醫(yī)學(xué)院
• 主分類號: A61K38/01
• 分類號: A61K38/01;A61P9/10;C12P21/06;C07K1/30
• 代理公司: 北京國坤專利代理事務(wù)所(普通合伙)11491
• 代理人: 趙紅霞

技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及油茶粕多肽在制備抗動脈粥樣硬化藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

動脈粥樣硬化是多因素共同作用引起的，發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，目前尚未完全闡明，是冠心病、腦梗死、外周血管病的主要原因，并且為冠心病的主要病理基礎(chǔ)，而冠心病是我國最常見的心血管疾病，隨著我國步入老年社會，冠心病成為危害人們健康的重大疾病和主要致死原因，其發(fā)病率和病死率逐年上升，目前心腦血管疾病風(fēng)險(xiǎn)因素在全球范圍內(nèi)一直處于快速增長的狀態(tài)，動脈粥樣硬化也是其最關(guān)鍵的病因。

目前關(guān)于動脈粥樣硬化發(fā)病機(jī)制的學(xué)說有很多，但是任何一種學(xué)說都不能全面解釋動脈粥樣硬化的發(fā)病機(jī)制，因此根據(jù)其相關(guān)危險(xiǎn)因素，目前動脈粥樣硬化的治療仍主要以一級預(yù)防為主，單純的藥物治療控制不佳，并且目前的手術(shù)治療如介入治療、外科搭橋術(shù)、血管移植、血管成形術(shù)等已經(jīng)非常成熟，但是手術(shù)本身對于血管的損傷以及術(shù)后的再狹窄、各種并發(fā)癥的出現(xiàn)都說明目前的治療方式仍未能有效地預(yù)防、控制、逆轉(zhuǎn)AS的病程。

油茶為常綠小喬木，屬茶科，山茶屬，是我國南方丘陵地區(qū)的一種優(yōu)良的木本油料植物。油茶主要由油茶殼和油茶籽組成，油茶是我國目前主要的油料植物之一，我國是產(chǎn)油茶大國，是世界上油茶品種最多、分布最廣、油茶籽產(chǎn)量最高的國家，僅油茶林的種植面積就達(dá)6000多萬畝(2015)。茶油產(chǎn)量由20多萬噸增加到51.8萬噸，年產(chǎn)油茶籽約370萬噸，而作為油茶籽榨油后剩下的副產(chǎn)品——油茶粕的年產(chǎn)量約為310萬噸。

然而大多數(shù)的油茶粕只是作為有機(jī)肥料來使用，造成優(yōu)質(zhì)資源的嚴(yán)重浪費(fèi)。在油茶粕中含有10％-20％的蛋白質(zhì)，其氨基酸組成為17種，其中8種為人體必需氨基酸，組氨酸和精氨酸兩種半必需氨基酸含量也較高，是一種天然非離子型表面活性劑，并有消炎、鎮(zhèn)痛、抗?jié)B透等藥理作用，為潛在的優(yōu)質(zhì)植物蛋白資源。此外油茶粕蛋白經(jīng)酶解后還可以制備成功能性多肽，生成的多肽及氨基酸等物質(zhì)具有多種生物學(xué)活性，如促進(jìn)免疫、激素調(diào)節(jié)、抗菌、抗氧化、抗病毒、降血壓、降血脂、降低膽固醇等功能特性。

發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明的目的是提供油茶粕多肽在制備抗動脈粥樣硬化藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明采用的ApoE-/-小鼠購自北京百奧賽圖基因生物技術(shù)有限公司，由贛南醫(yī)學(xué)院科研中心實(shí)驗(yàn)動物中心繁殖，取八周ApoE-/-小鼠雄鼠喂食高脂飼料(小鼠標(biāo)準(zhǔn)飼料+1.25％膽固醇+15％脂肪+0.5％膽酸鹽)8-12周，構(gòu)建動脈粥樣硬化疾病小鼠模型。給予8周ApoE-/-小鼠高脂飼料8周后即可構(gòu)建動脈粥樣硬化模型，設(shè)置實(shí)驗(yàn)組、對照組、空白組。實(shí)驗(yàn)組在發(fā)病后給予油茶粕多肽，并給予高劑量；陽性對照組給予辛伐他汀進(jìn)行治療；陰性對照組則給予生理鹽水。由于血脂異常為動脈粥樣硬化最主要的致病因素之一，因此給藥期間每隔2周眼眶取血一次，并用試劑盒測定小鼠血脂水平，檢測指標(biāo)主要有：甘油三酯、總膽固醇、低密度脂蛋白，以觀察給予油茶粕多肽后的血脂水平變化，給藥8周后取材，通過主動脈取材后大體油紅O染色觀察，直接了解油茶粕多肽治療小鼠動脈粥樣硬化疾病的具體情況。結(jié)果表明，油茶粕多肽對動脈粥樣硬化發(fā)病小鼠具有非常好的治療作用，降血脂療效比陽性對照辛伐他汀組的治療效果更好。

因此，本發(fā)明的油茶粕多肽能在制備抗動脈粥樣硬化藥物中的應(yīng)用。

所述的油茶粕多肽優(yōu)選是通過以下方法制備的：將油茶粕粉碎后用石油醚脫脂，脫脂后的油茶粕粉末先后用纖維素酶和α-淀粉酶酶解，酶解后的油茶粕經(jīng)堿提酸沉得到油茶粕蛋白沉淀，油茶粕蛋白沉淀再經(jīng)堿性蛋白酶酶解，酶解液滅酶后，離心收集上清液即得油茶粕多肽。

進(jìn)一步優(yōu)選，所述的油茶粕多肽優(yōu)選是通過以下方法制備的：

將油茶粕粉碎后，過60目篩，按料液比1g：40ml加入石油醚進(jìn)行脫脂，脫脂后的油茶粕放置室溫進(jìn)行風(fēng)干，即得到脫脂后的油茶粕粉末；

脫脂后的油茶粕粉末按料液比1g：30ml加入蒸餾水，然后再按蒸餾水質(zhì)量2％的量加入纖維素酶，在反應(yīng)溫度50℃、pH值6.5、時(shí)間60min的條件下反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后再按蒸餾水質(zhì)量1.3％的酶添加量加入α-淀粉酶，55℃反應(yīng)60min后酶預(yù)處理結(jié)束，得到酶預(yù)處理后的油茶粕；

酶預(yù)處理后的油茶粕用NaOH調(diào)整pH值至10.2后50℃水浴反應(yīng)120min，過濾去渣，取得的上清液再調(diào)整pH值至4.2后常溫反應(yīng)60min，得到油茶粕蛋白混懸液，離心后去除上清液，所得沉淀經(jīng)冷凍干燥后即為油茶粕蛋白沉淀；