[發明專利]利用電噴霧質子化裂解-質譜多反應檢測模式對中藥中三萜皂苷進行定性和定量的方法

有效

• 申請號: 201711164997.4
• 申請日: 2017-11-21
• 公開（公告）號: CN107727772B
• 公開（公告）日: 2020-04-10
• 發明（設計）人: 夏永剛;梁軍;匡海學;楊炳友
• 申請（專利權）人: 匡海學;夏永剛;楊炳友
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨;馬鑫

1.利用電噴霧質子化裂解-質譜多反應監測(MRM)模式對中藥中三萜皂苷進行定性和定量的方法，其特征在于，包括以下步驟：三萜皂苷在含有甲酸或甲酸氨的流動相中形成穩定的[M+H]⁺和/或[M+NH₄]⁺分子離子峰，運用液相色譜-串聯四級桿質譜聯用儀，采用電噴霧陽離子串聯質譜檢測模式(ESI⁺-MRM)，通過單因素實驗法和響應面法，快速在線優化包括去簇電壓(DP)以及碰撞能(CE)在內的質譜參數，使之形成高強度的中藥三萜皂苷MRM靶向離子對，通過此系列特征性的MRM靶向離子對，達到對中藥中三萜皂苷快速定性和定量分析的目的。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，根據質子化裂解靶向離子對Q₁/Q₃的計算公式，即Q₁＝[M+H]⁺或[M+NH₄]⁺)和Q₃＝[苷元+H-H₂O]⁺或[苷元+H-2H₂O]⁺)或[苷元+H-nH₂O]⁺，其中n為大于或等于0的整數，分別預測得出中藥三萜皂苷MRM系列特征性的靶向離子對。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，還包括對碰撞室射出電壓(CXP)質譜參數的優化。

4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，在單因素實驗的基礎上，若考慮去簇電壓(DP)以及碰撞能(CE)兩個主要因素的影響，優選使用Central-Composite design方法；若考慮去簇電壓(DP)、碰撞能(CE)以及碰撞室射出電壓(CXP)三個因素的影響，優選使用Box–Behnken design方法。

5.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的方法按照以下步驟進行：

(1)建立MRM靶向離子

采用質譜MRM檢測模式，以皂苷標準品為模板化合物，通過響應面優化質子/氨化離子裂解MRM靶向離子對，根據質子化裂解靶向MRM離子對Q₁/Q₃的計算公式，Q₁＝[M+H]⁺或[M+NH₄]⁺)和Q₃＝[苷元+H-H₂O]⁺或[苷元+H-2H₂O]⁺)或[苷元+H-nH₂O]⁺，其中n為大于等于0的整數，提前預測得出中藥三萜皂苷標準品的靶向離子對；

(2)基于響應面法優化DP、CE和CXP等質譜參數

用Central-Composite design方法優化兩因素的DP和CE值，用Box–Behnken design方法優化三因素的DP、CE和CXP值；

(3)標準品溶液的配制

精密稱取皂苷標準品，精密稱定，加甲醇配制成把標準品儲備液稀釋成不同濃度的標準品溶液；于4℃保存備用；

(4)運用液相色譜-串聯四級桿質譜聯用儀對標準品溶液以及樣品溶液進行檢測；

(5)標準曲線的建立

以不同濃度的皂苷標準品的峰面積為縱坐標，以皂苷標準品的濃度為橫坐標進行線性回歸分析，建立標準曲線；

(6)樣品溶液中皂苷的含量的計算

樣品溶液按照步驟(4)的方法進行測定，根據步驟(5)建立的標準曲線計算出樣品溶液中皂苷的含量。

6.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的樣品為類葉牡丹或遼東楤木。