[發明專利]利用電噴霧質子化裂解-質譜多反應檢測模式對中藥中三萜皂苷進行定性和定量的方法

有效

• 申請號: 201711164997.4
• 申請日: 2017-11-21
• 公開（公告）號: CN107727772B
• 公開（公告）日: 2020-04-10
• 發明（設計）人: 夏永剛;梁軍;匡海學;楊炳友
• 申請（專利權）人: 匡海學;夏永剛;楊炳友
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨;馬鑫

技術領域

本發明涉及一種中藥中三萜皂苷的定量方法，特別涉及一種基于電噴霧質子化裂解-質譜多反應檢測模式對中藥中三萜皂苷進行定性和定量的方法。本發明屬于化學分析及檢測技術領域。

背景技術

三萜皂苷作為中藥中主要有效部位或有效部位群，已經被研究者廣泛接受。然而，三萜皂苷分子缺少發色團、紫外為末端吸收、不具揮發性的特點，因此目前缺少行之有效的三萜皂苷定量方法。現階段中藥三萜皂苷的定量方法，主要采用高效液相色譜-紫外光譜法、高效液相色譜-蒸發光檢測法和高效液相色譜-電噴霧-串聯質譜法等。

雖然液相色譜-電噴霧串聯質譜法(LC-MS/MS-MRM)已用于中藥三萜皂苷的定量研究，但主要選擇[M+Na]⁺和[M-H]^-做為母離子，且優化方式主要采用注射泵優化去簇電壓(DP)、碰撞能(CE)和碰撞室射出電壓(CXP)等主要質譜參數，獲得相應參數最優值。雖然采用電噴霧串聯質譜法通過MRM模式，碎裂[M+Na]⁺和[M-H]^-母離子對中藥中常量三萜皂苷能達到滿意定量結果，然而該方法在檢測部分中藥皂苷時檢測靈敏度較低，而且定量困難。

發明內容

本發明的目的在于運用液相色譜-串聯四級桿質譜技術，采用電噴霧陽離子串聯質譜檢測模式(ESI⁺-MS/MS)，建立一種利用電噴霧質子化裂解-質譜多反應檢測模式對中藥中三萜皂苷進行定性和定量的方法。

為了達到上述目的，本發明采用了以下技術手段：

一種利用電噴霧質子化裂解-質譜多反應監測(MRM)模式對中藥中三萜皂苷進行定性和定量的方法，包括以下步驟：三萜皂苷在含有甲酸或甲酸氨的流動相中形成穩定的[M+H]⁺和/或[M+NH₄]⁺分子離子峰，運用液相色譜-串聯四級桿質譜聯用儀，采用電噴霧陽離子串聯質譜檢測模式(ESI⁺-MRM)，通過單因素實驗法和響應面法，快速在線優化包括去簇電壓(DP)以及碰撞能(CE)在內的質譜參數，使之形成高強度的中藥三萜皂苷MRM靶向離子對，通過此系列特征性的MRM靶向離子對，達到對中藥中三萜皂苷快速定性和定量分析的目的。

中藥三萜皂苷[M+NH₄]⁺分子離子峰，易于中性損失NH₃基團(17Da)，轉化成 [M+H]⁺分子離子峰。[M+H]⁺離子易于發生裂解，形成系列特征性的MRM靶向離子對，其中包括系列高強度的[苷元+H-nH₂O]⁺(n＝0,1,2,....)碎片離子峰。出現多少苷元脫水碎片離子峰與三萜皂苷的分子量、含糖基的種類、含糖基的數量、糖基的連接方式和含糖鏈的數量等因素關系不大，但與苷元所含羥基基團的數量明顯有關。

在本發明所述的方法中，優選的，根據質子化裂解靶向離子對Q₁/Q₃的計算公式，即Q₁＝[M+H]⁺或[M+NH₄]⁺)和Q₃＝[苷元+H-H₂O]⁺或[苷元+H-2H₂O]⁺)或[苷元 +H-nH₂O]⁺，其中n為大于或等于0的整數，分別預測得出中藥三萜皂苷MRM系列特征性的靶向離子對。

DP、CE和CXP是影響中藥皂苷質子化裂解MRM離子對產生的重要因素，尤其是DP和CE值。因此，在本發明所述的方法中，優選的，還包括對碰撞室射出電壓(CXP)質譜參數的優化。可通過單因素實驗法和響應面法優化DP、CE和CXP 等質譜參數，預測得出產生最大MRM靶向離子對響應值所需最優的DP、CE和CXP 等質譜參數值。

在本發明所述的方法中，在單因素實驗的基礎上，若考慮去簇電壓(DP)以及碰撞能(CE)兩個因素影響，優選使用Central-Composite design方法；若考慮去簇電壓 (DP)、碰撞能(CE)以及碰撞室射出電壓(CXP)三個因素影響，優選使用Box-Behnken design方法。

在本發明所述的方法中，優選的，所述的方法按照以下步驟進行：

(1)建立MRM靶向離子