[發(fā)明專利]一種息半夏的組織培養(yǎng)繁殖方法及用途

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711161758.3
• 申請(qǐng)日: 2017-11-21
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107821165A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-03-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉志偉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 劉志偉
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 天津市杰盈專利代理有限公司12207
• 代理人: 朱紅星

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種息半夏的組織培養(yǎng)繁殖方法及用途。

背景技術(shù)

息半夏為天南星科半夏屬多年生野生草本植物, 適應(yīng)性強(qiáng)，喜溫濕，耐低溫，可與小麥等作物共生，在荒坡、堤埂與野草伴長(zhǎng)。對(duì)土質(zhì)、地力要求不嚴(yán)。無(wú)論砂土，粘土均能生長(zhǎng)。其塊莖可入藥，是中國(guó)中藥寶庫(kù)中的一種重要藥材。息半夏歷史悠久，中外馳名。因息半夏因其個(gè)大、粉足、品質(zhì)優(yōu)良、療效顯著廣受外商歡迎。國(guó)家將息半夏列為重點(diǎn)出口藥材，遠(yuǎn)銷美國(guó)、日本和東南亞各國(guó)。在香港市場(chǎng)上也很受歡迎。半夏的使用頻率很高,據(jù)統(tǒng)計(jì),在558 種中藥處方中,半夏的使用頻率居第22 位。半夏的傳統(tǒng)藥理作用很多,現(xiàn)代藥理及臨床研究表明,半夏具有抗癌、抗燥濕化痰、和胃止嘔、咳喘、抗心率失常等作用。

近年來(lái)，隨著市場(chǎng)經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展，息半夏遠(yuǎn)銷日、韓及歐美市場(chǎng)，長(zhǎng)期供不應(yīng)求，國(guó)內(nèi)各大藥市常年出現(xiàn)有價(jià)無(wú)藥的局面。但由于自然環(huán)境的破壞大量農(nóng)藥的使用和過(guò)度的采挖，導(dǎo)致半夏野生資源急劇減少; 而人工栽培由于受技術(shù)成本等因素的影響，發(fā)展緩慢，就形成了半夏野生資源越少越貴，越貴越挖，越挖越少的惡性循環(huán)。野生資源不斷減少和息半夏栽培技術(shù)遠(yuǎn)遠(yuǎn)滯后三者之間矛盾的日益加劇，息半夏資源蘊(yùn)藏量和產(chǎn)量都大幅下降，息半夏的野生資源供不應(yīng)求, 人工栽培因繁殖率低及品種退化等問(wèn)題限制了息半夏的產(chǎn)量和質(zhì)量的提高, 價(jià)格居高不下。為了改變這種現(xiàn)狀,應(yīng)用現(xiàn)代生物學(xué)手段對(duì)其進(jìn)行組織培養(yǎng),建立息半夏無(wú)性系快速繁殖系統(tǒng), 提高其繁殖系數(shù); 增加種植面積，使農(nóng)民增收，建立息野生半夏無(wú)性快速繁殖體系，為息半夏工廠化生產(chǎn)提供可重復(fù)的技術(shù)和依據(jù)。目前，現(xiàn)有技術(shù)中未見(jiàn)有關(guān)息半夏整套組織培養(yǎng)技術(shù)方法的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種息半夏組織培養(yǎng)繁殖方法。利用本發(fā)明的方法對(duì)息半夏進(jìn)行大規(guī)模繁殖，以解決息半夏在天然狀態(tài)下繁殖困難以及息半夏資源日益匱乏問(wèn)題，實(shí)現(xiàn)息半夏的大規(guī)模人工種植，提高息半夏產(chǎn)量，以滿足市場(chǎng)需求。

為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，本發(fā)明提供了如下的技術(shù)方案：

息半夏組織培養(yǎng)繁殖技術(shù)，包括以下步驟：

一種息半夏的組織培養(yǎng)繁殖方法，其特征在于按如下的步驟進(jìn)行：

(1)從大田直接采集息半夏，經(jīng)室內(nèi)種植后，利用新長(zhǎng)出的葉片、葉柄作為外植體，消毒過(guò)后在接種到培養(yǎng)基上，然后以其葉片、葉柄作為外植體誘導(dǎo)愈傷組織；取息半夏葉片、葉柄，首先用70-75％(w/w)的酒精浸泡30-60s，再用0.1％(w/w)的升汞消毒5-10min，使用無(wú)菌水清洗5次，將其切成3-5mm大小的小塊，接種在誘導(dǎo)愈傷培養(yǎng)基上暗培養(yǎng)30天，得到愈傷組織后，移至分化培養(yǎng)基上使其分化，分化的叢芽切成單個(gè)芽后使其在增殖培養(yǎng)基上繼續(xù)生長(zhǎng)。在溫度為25℃，光照3000Lx，16h/d的光周期條件下培養(yǎng)30天，即可長(zhǎng)出息半夏無(wú)菌苗；

(2)分別以步驟(1)的旱半夏無(wú)菌苗的葉片、葉柄為外植體，接入到MS添加6BA、NAA和白糖的培養(yǎng)基中，其中，MS培養(yǎng)基中6BA的濃度為 1.0-4.0mg/L，NAA的濃度為0.1-1.0mg/L，白糖的濃度為20-45mg/L，培養(yǎng)基的 pH值為5.8，瓊脂粉為6-8g/L，在日產(chǎn)高壓自動(dòng)滅菌鍋中，溫度121℃下滅菌20min，冷卻培養(yǎng)基至室溫，在24-26℃，暗培養(yǎng)下，誘導(dǎo)愈傷組織；

(3)將步驟(2)中產(chǎn)生的愈傷組織接入MS添加6BA、NAA和白糖的培養(yǎng)基上，其中MS培養(yǎng)基中6BA的濃度為0.5.-2.0mg/L，NAA的濃度為0.1-2.0mg/L，白糖糖的濃度為20--45g/L，在24-26℃，光照3000Lx，光周期16h/d下培養(yǎng)20天，可萌發(fā)出不定芽;

(4)將步驟(3)中萌發(fā)出的叢生芽切成單芽，接入MS 添加6BA和IBA和蔗糖的培養(yǎng)基上，其中MS培養(yǎng)基中的濃度為6BA為0.1-1.0mg/L，IBA的濃度為0.5-2.0mg/L，蔗糖的濃度為20-45g/L，在24-26℃，光照3000Lx，光周期 16h/d下培養(yǎng)20天，待萌發(fā)出大量不定芽時(shí)進(jìn)行生根培養(yǎng);

(5)將步驟(4)中萌發(fā)出的息半夏不定芽切出后，在超凈臺(tái)中轉(zhuǎn)入MS添加IBA的培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)，其中，MS培養(yǎng)基中IBA的濃度為 1.0-4.0mg/L，在24-26℃，光照3000Lx，光周期16-20h/d下培養(yǎng)20天；

(6)當(dāng)步驟(5)中已生根的息半夏組培苗生長(zhǎng)至4-6cm時(shí)，根長(zhǎng)到2-3cm時(shí)，根數(shù)4-7根左右時(shí)將瓶蓋擰松半打開(kāi)進(jìn)行練苗3-5天；