[發(fā)明專利]一種息半夏的組織培養(yǎng)繁殖方法及用途

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711161758.3
• 申請日: 2017-11-21
• 公開（公告）號: CN107821165A
• 公開（公告）日: 2018-03-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉志偉
• 申請（專利權(quán)）人: 劉志偉
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 天津市杰盈專利代理有限公司12207
• 代理人: 朱紅星

1.一種息半夏的組織培養(yǎng)繁殖方法，其特征在于按如下的步驟進行：

(1)從大田直接采集息半夏，經(jīng)室內(nèi)種植后，利用新長出的葉片、葉柄作為外植體，消毒過后在接種到培養(yǎng)基上，然后以其葉片、葉柄作為外植體誘導愈傷組織；取息半夏葉片、葉柄，首先用70-75％(w/w)的酒精浸泡30-60s，再用0.1％(w/w)的升汞消毒5-10min，使用無菌水清洗5次，將其切成3-5mm大小的小塊，接種在誘導愈傷培養(yǎng)基上暗培養(yǎng)30天，得到愈傷組織后，移至分化培養(yǎng)基上使其分化，分化的叢芽切成單個芽后使其在增殖培養(yǎng)基上繼續(xù)生長；在溫度為25℃，光照3000Lx，16h/d的光周期條件下培養(yǎng)30天，即可長出息半夏無菌苗；

(2)分別以步驟(1)的旱半夏無菌苗的葉片、葉柄為外植體，接入到MS添加6BA、NAA和白糖的培養(yǎng)基中，其中，MS培養(yǎng)基中6BA的濃度為 1.0-4.0mg/L，NAA的濃度為0.1-1.0mg/L，白糖的濃度為20-45mg/L，培養(yǎng)基的 pH值為5.8，瓊脂粉為6-8g/L，在日產(chǎn)高壓自動滅菌鍋中，溫度121℃下滅菌20min，冷卻培養(yǎng)基至室溫，在24-26℃，暗培養(yǎng)下，誘導愈傷組織；

(3)將步驟(2)中產(chǎn)生的愈傷組織接入MS添加6BA、NAA和白糖的培養(yǎng)基上，其中MS培養(yǎng)基中6BA的濃度為0.5.-2.0mg/L，NAA的濃度為0.1-2.0mg/L，白糖糖的濃度為20--45g/L，在24-26℃，光照3000Lx，光周期16h/d下培養(yǎng)20天，可萌發(fā)出不定芽;

(4)將步驟(3)中萌發(fā)出的叢生芽切成單芽，接入MS 添加6BA和IBA和蔗糖的培養(yǎng)基上，其中MS培養(yǎng)基中的濃度為6BA為0.1-1.0mg/L，IBA的濃度為0.5-2.0mg/L，蔗糖的濃度為20-45g/L，在24-26℃，光照3000Lx，光周期 16h/d下培養(yǎng)20天，待萌發(fā)出大量不定芽時進行生根培養(yǎng);

(5)將步驟(4)中萌發(fā)出的息半夏不定芽切出后，在超凈臺中轉(zhuǎn)入MS添加IBA的培養(yǎng)基中進行生根培養(yǎng)，其中，MS培養(yǎng)基中IBA的濃度為 1.0-4.0mg/L，在24-26℃，光照3000Lx，光周期16-20h/d下培養(yǎng)20天；

(6)當步驟(5)中已生根的息半夏組培苗生長至4-6cm時，根長到2-3cm時，根數(shù)4-7根左右時將瓶蓋擰松半打開進行練苗3-5天；

(7)將步驟(6)中經(jīng)過練苗的息半夏小苗從培養(yǎng)平中取出，清洗兩次，并用多菌靈浸泡30min后，移栽至基質(zhì)培養(yǎng)土中，其中基質(zhì)是由菜田土∶珍珠巖按體積比2∶1配制；

其中基本培養(yǎng)基和其它組培階段培養(yǎng)基的各組分與每升所含量為：

基本培養(yǎng)基：用MS培養(yǎng)基，附加：白糖20-45g/L，瓊脂粉6g-8g/L，調(diào)節(jié)pH5.8-6.0；

愈傷組織誘導培養(yǎng)基：MS+6BA1.0-4.0mg/L+NAA 0.1-1.0mg/L；

分化培養(yǎng)基：MS+6BA0.5-2.0mg/L+NAA 0.1-2.0mg/L；

增殖培養(yǎng)基：MS+ 6BA 0.1-1.0mg/L+IBA 0.5-2.0mg/L；

生根培養(yǎng)基：MS+IBA1-4mg/L。

2.權(quán)利要求1所述息半夏的組織培養(yǎng)繁殖方法，其中所述的步驟(2)中的調(diào)節(jié)pH值是利用0.1N鹽酸或2% 濃度的氫氧化鈉調(diào)整。

3.權(quán)利要求1所述息半夏的組織培養(yǎng)繁殖方法在用于息半夏的離體快速繁殖方面的應用。