[發明專利]一種與野生二粒小麥抗白粉病基因緊密連鎖的分子標記及其應用

在審

• 申請號: 201711161513.0
• 申請日: 2017-11-21
• 公開（公告）號: CN107630105A
• 公開（公告）日: 2018-01-26
• 發明（設計）人: 孔令讓;尹華燕;王宏偉;李安飛;馬信
• 申請（專利權）人: 山東農業大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 北京中濟緯天專利代理有限公司11429
• 代理人: 張紅軍

技術領域

本發明分子遺傳育種領域，具體涉及一種與野生二粒小麥抗白粉病基因緊密連鎖的分子標記及其應用。

背景技術

野生二粒小麥(Triticum dicoccoides，2n=4x=28，AABB)是普通小麥(Triticum aestivum，2n=6x=42，AABBDD)的野生四倍體祖先，其核基因組由A組和B組組成，細胞質基因組來自于B組。普通小麥A、B基組的供體種是野生二粒小麥，因此其與普通小麥的A、B染色體組具有較高的同源性。野生二粒小麥的多樣性中心大約起源于一萬年前，位于近東新月沃地，廣泛分布在目前的以色列、土耳其、伊朗、敘利亞等國境內。以色列野生二粒小麥對小麥的主要病害白粉病、條銹病、葉銹病等具有一定的抗性，并且在耐旱、耐鹽、礦質養分利用率等方面表現優良，在種質資源研究和現代小麥品種的遺傳改良中起到重要的作用。

小麥白粉病是由禾本科布氏白粉菌（Blumeria graminisf.sp.tritici）引起的氣傳真菌性病害，其生理小種多、變異快，在各主要麥區均有分布，嚴重威脅小麥的安全生產。“綠色革命”以來，隨著小麥半矮稈品種的推廣、氮肥施用量的增加以及全球氣候變暖，造成麥田郁閉，濕度過大，白粉病害流行，逐漸成為我國麥區的主要病害之一。另一方面，白粉病病原菌生理小種復雜多變，導致品種抗性喪失頻繁。目前我國小麥推廣品種中仍然有效或在部分地區有效的抗白粉病基因主要是Pm2、Pm4a、Pm4b和Pm21等少數幾個基因。因此，在育種實踐中，加快利用一些抗性較好的抗白粉病新基因，如Pm12、Pm13、Pm16、Pm30、Pm36、Pm40、Pm41、Pm42、Pm43，積極發掘新的抗白粉病基因并應用于育種實踐， 對于提高新育成小麥新品種的白粉病抗性，延長抗病品種使用時間，減緩抗病性“喪失”進程，提高抗性持久性有重要意義。

抗病基因的分子標記及連鎖圖譜建立是對目標基因進行精細遺傳定位及圖位克隆抗病基因的基礎，同時更是分子標記輔助育種的有力工具。SSR標記是一類廣泛存在于基因組上的、由幾個核苷酸重復單位組成的串聯重復序列。由于在基因組上數量豐富、多態性高、共顯性遺傳、操作簡單、結果穩定可靠等優點而被廣泛應用與種質鑒定、基因的分子標記定位及分子標記輔助育種中。

發明內容

本發明提供一種與野生二粒小麥抗白粉病基因緊密連鎖的分子標記以及應用。

本發明是通過以下技術方案實現的：

本發明提供一種野生二粒小麥抗白粉病基因分子標記，其特征在于：所述分子標記與以色列引進野生二粒小麥ES4中抗白粉病基因緊密連鎖，

所述分子標記是顯性SSR標記sdau714，用于擴增所述的分子標記的引物如下：

sdau714-F：5’-tcatcggcacattgggtag-3’ ，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；

sdau714-R：5’-cagacactccttgacggttt-3’ ，其核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

優選的，利用所述的分子標記引物sdau714進行PCR擴增，在抗病材料ES4中擴增出一條807bp的特異片段。

優選的，所述的分子標記sdau714，與野生二粒小麥ES4中抗白粉病基因的遺傳距離為0.1cM。

優選的， 所述分子標記sdau714用于鑒定野生二粒小麥ES4中抗白粉病基因的步驟如下：

1）以野生二粒小麥ES基因組DNA為PCR模板，以SSR標記sdau714為引物，進行PCR擴增，反應體系為10μl，所述反應體系包括：80-120ng/μl野生二粒小麥基因組DNA，2×Taq MasterMix，無菌水定容至10μl；

2）PCR擴增程序為：95℃預變性5min；94℃變性30s，65℃退火30s，72℃延伸1min，以后每個循環依次降低1℃，直到53℃，共12個循環；94℃變性30s，56℃退火30s，72℃延伸1min，26個循環；72℃延伸10min，10℃保存備用；

3）取PCR產物8μl，限制性內切酶HhaI1μl，10×NEBuffer1.5μl，無菌水定容至15μl酶切體系，37℃條件下酶切2h；

4）電泳為1%的瓊脂糖凝膠，將10μl PCR產物和3μl上樣緩沖液混合后點樣，120V電壓下電泳30min，溴化乙錠染色后拍照；