[發(fā)明專利]一種與野生二粒小麥抗白粉病基因緊密連鎖的分子標(biāo)記及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711161513.0
• 申請日: 2017-11-21
• 公開（公告）號: CN107630105A
• 公開（公告）日: 2018-01-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孔令讓;尹華燕;王宏偉;李安飛;馬信
• 申請（專利權(quán)）人: 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 北京中濟(jì)緯天專利代理有限公司11429
• 代理人: 張紅軍

1.一種與野生二粒小麥抗白粉病基因緊密連鎖的分子標(biāo)記，其特征在于：所述分子標(biāo)記與以色列引進(jìn)野生二粒小麥ES4中抗白粉病基因緊密連鎖，所述分子標(biāo)記是顯性SSR標(biāo)記sdau714，用于擴(kuò)增所述的分子標(biāo)記的引物如下：

sdau714-F：5’-tcatcggcacattgggtag-3’ ，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；

sdau714-R：5’-cagacactccttgacggttt-3’ ，其核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種與野生二粒小麥抗白粉病基因緊密連鎖的分子標(biāo)記，其特征在于：利用所述的分子標(biāo)記引物sdau714進(jìn)行PCR擴(kuò)增，在抗病材料ES4中擴(kuò)增出一條807bp的特異片段。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種與野生二粒小麥抗白粉病基因緊密連鎖的分子標(biāo)記，其特征在于： 所述的分子標(biāo)記sdau714，與野生二粒小麥ES4中抗白粉病基因的遺傳距離為0.1cM。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種與野生二粒小麥抗白粉病基因緊密連鎖的分子標(biāo)記，其特征在于： 所述分子標(biāo)記sdau714用于鑒定野生二粒小麥ES4中抗白粉病基因的步驟如下：

1）以野生二粒小麥ES基因組DNA為PCR模板，以SSR標(biāo)記sdau714為引物，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，反應(yīng)體系為10μl，所述反應(yīng)體系包括：80-120ng/μl野生二粒小麥基因組DNA，2×Taq MasterMix，無菌水定容至10μl；

2）PCR擴(kuò)增程序?yàn)椋?5℃預(yù)變性5min；94℃變性30s，65℃退火30s，72℃延伸1min，以后每個循環(huán)依次降低1℃，直到53℃，共12個循環(huán)；94℃變性30s，56℃退火30s，72℃延伸1min，26個循環(huán)；72℃延伸10min，10℃保存?zhèn)溆茫?/p>

3）電泳為1%的瓊脂糖凝膠，將10μl PCR產(chǎn)物和3μl上樣緩沖液混合后點(diǎn)樣，120V電壓下電泳30min，溴化乙錠染色后拍照；

4）分析鑒定，能擴(kuò)增出807bp特異性條帶，則說明小麥種質(zhì)中存在抗白粉病基因，否則，待測小麥種質(zhì)中不存在野生二粒小麥抗白粉病基因。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種與野生二粒小麥抗白粉病基因緊密連鎖的分子標(biāo)記，其特征在于：野生二粒小麥ES4抗白粉病基因連鎖的分子標(biāo)記在輔助選擇育種中的應(yīng)用。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種與野生二粒小麥抗白粉病基因緊密連鎖的分子標(biāo)記，其特征在于：所述抗白粉病基因來源于以色列野生二粒小麥，位于4A染色體的長臂末端。