[發明專利]肝素酶凍干制劑、肝素酶杯及其制備方法和用途

在審

• 申請號: 201711158201.4
• 申請日: 2017-11-20
• 公開（公告）號: CN108148889A
• 公開（公告）日: 2018-06-12
• 發明（設計）人: 艾峰;孫瑩;孫軍
• 申請（專利權）人: 深圳優迪生物技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/56
• 分類號: C12Q1/56;C12Q1/34
• 代理公司: 北京清亦華知識產權代理事務所(普通合伙) 11201
• 代理人: 趙天月

本發明涉及體外診斷試劑技術領域，具體涉及一種肝素酶凍干制劑、肝素酶杯及其制備方法和用途。本發明提供的肝素酶凍干制劑的復溶酶活收率至少為75％。本發明提供的肝素酶杯，包括：杯體和肝素酶凍干制劑，所述杯體內限定出容納空間；所述肝素酶凍干制劑設置在所述容納空間中。本發明還提供了一種肝素酶凍干制劑的方法，包括：將含有預定比例的所述肝素酶、所述保護劑、所述緩沖鹽和所述防腐劑的水溶液依次進行預凍處理、升華處理和干燥處理，以便獲得所述肝素酶凍干制劑。將本發明肝素酶凍干制劑和肝素酶杯應用在血液樣本的檢測過程中，其檢出靈敏度高，而且能夠顯著提升肝素酶在凍干過程中的活性和穩定性。

技術領域

本發明涉及體外診斷試劑技術領域，具體涉及一種肝素酶凍干制劑、肝素酶杯及其制備方法和用途。

背景技術

肝素酶是一類能夠特異性裂解肝素和類肝素主鏈糖苷鍵的酶，肝素酶的應用十分廣泛，如清除血液中殘存肝素、防止凝血、生產低分子量肝素、研究肝素的結構。另外，肝素酶可以用于血液樣本的生化檢測例如血栓彈力圖。

然而，目前的肝素酶制劑仍有待改進。

發明內容

本發明旨在至少在一定程度上解決相關技術中的技術問題之一。為此，本發明的一個目的在于提出一種能夠同時滿足有效保持酶活、保存效期長且靈敏感高的肝素酶凍干制劑和肝素酶杯，尤其是提供了一種用于血液檢測的肝素酶杯的制備方法。

血液凝固過程的最終結果是形成血凝塊；血凝塊的物理性質(血凝時間、速率、血塊強度)將決定病人是否具有正常的凝血功能，是否會出血或形成血栓；肝素類藥物可增加血液中抗凝血酶的活性，從而起到抗凝作用。本發明的發明人在研究過程中發現，借助于血栓彈力圖檢測時，普通杯中無肝素酶，因此血凝時間會受到肝素的影響；肝素酶杯中包被有肝素酶，可有效降解血液中的肝素，不受殘留肝素影響。通過將普通杯血栓彈力圖曲線和肝素酶杯血栓彈力圖曲線疊加，對比凝血時間，即可評估肝素治療前后全血的凝血功能。

因此，在肝素酶杯的生產過程中如何在生產過程中保持肝素酶的活性，不造成酶活的嚴重損失，降低產品成本同時對肝素檢出敏感，是一個關鍵的問題。發明人進行了一系列的實驗探索和研究，以期尋找出一種能夠同時滿足對酶活影響小、顯著延長肝素酶杯保存效期對肝素檢出敏感的肝素酶凍干制劑，除肝素酶以外，含有保護劑以及防腐劑等成分，而且用于肝素的檢測，其檢出靈敏度高，能夠顯著提升肝素酶在凍干過程中的活性和穩定性。

根據本發明的一個方面，本發明提供了一種肝素酶凍干制劑，所述肝素酶凍干制劑的復溶酶活收率至少為75％。

肝素酶能夠特異性裂解肝素和類肝素主鏈糖苷鍵，其應用十分廣泛，如清除血液中殘存肝素、防止凝血、生產低分子量肝素、研究肝素的結構。肝素酶是一種很容易失活的酶，可以將其制備成凍干粉提高其穩定性，但因肝素酶比較脆弱，凍干過程酶活損失30％以上，導致肝素酶成本高，限制了其在體外診斷試劑領域的廣泛應用。而本發明提供的肝素酶凍干制劑，其復溶酶活收率至少為75％以上，甚至是85％以上，極大的提高了肝素酶的保存活力，可以用于與肝素酶相關的試劑盒的制備中，或者用來制備體外診斷試劑。

另外，根據本發明的上述實施例，上述肝素酶凍干制劑還可以進一步包括如下附加技術特征至少之一：

根據本發明的實施例，所述肝素酶凍干制劑的酶活有效期在12個月以上，所述肝素酶凍干制劑在12個月后的酶活損失在10％以下。將本發明提供的肝素酶凍干制劑在2-8℃條件下放置12個月甚至是15個月時，其酶活損失與未放置之前相比，酶活損失在10％以下。放置12個月的酶活損失在6％以下，放置15個月的酶活損失在9％以下，可以極大的滿足工業生產的需求。

根據本發明的實施例，所述肝素酶為肝素酶I。肝素酶I凍干制劑，可以保留肝素酶I的活性，凍干前后對比肝素酶I的活性，酶活收率在75％以上。

根據本發明的實施例，所述肝素酶凍干制劑含有：