[發明專利]一種黑曲霉yy07菌株及其在固體發酵生產飼用酸性蛋白酶中的應用

有效

• 申請號: 201711156442.5
• 申請日: 2017-11-20
• 公開（公告）號: CN107760612B
• 公開（公告）日: 2020-04-17
• 發明（設計）人: 張秀江;胡虹;王秋菊;杜訊;谷立峰;胡宜亮;慕琦;呂國坤;卓輝
• 申請（專利權）人: 河南省科學院生物研究所有限責任公司
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N9/62;A23K20/189;A23K50/75;A23K50/30;A23K50/60;C12R1/685
• 代理公司: 鄭州天陽專利事務所(普通合伙) 41113
• 代理人: 聶孟民

1.一種固體發酵生產飼用酸性蛋白酶的菌株yy07在生產飼用酸性蛋白酶中的應用方法，其特征在于，所述的菌株yy07分類命名為黑曲霉（Aspergillus niger），2017年11月1日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號CGMCC No.14630，該菌株是由黑曲霉原始菌株經紫外線和亞硝基胍聯合誘變獲得，其應用方法包括以下步驟：

（1）、擴增培養：將黑曲霉（Aspergillus niger）yy07接種到斜面培養基中進行擴增培養，所述的斜面培養基為馬鈴薯培養基（PDA），其組分為去皮馬鈴薯200g，切成小塊，加水1000 mL，煮沸30分鐘，過濾，取濾液，加水至1000mL，混勻，加葡萄糖20g、瓊脂15g，溶解后，在1.1 kg/cm²壓力下滅菌30分鐘制成，接種量為每10mL培養基中接種一株黑曲霉（Aspergillus niger）yy07，在35-40℃下培養70-75h，置于斜面分離培養基中，所述的斜面分離培養基為察氏培養基，是由重量計的：硝酸鈉3g、磷酸氫二鉀1g、七水硫酸鎂0.5g、氯化鉀0.5g、硫酸亞鐵0.01g、蔗糖30g、瓊脂20g，加蒸餾水1L，加熱溶解，121℃滅菌20min制成，菌絲長滿斜面分離培養基，作為斜面培養基種子；

（2）、配制固體發酵培養基：固體發酵培養基是由重量計的麥麩800-900g、豆粕80-100g、玉米粉18-22g和硫酸銨18-22g混合，攪拌均勻，加水至含水量為65-70%，調節pH為6.5，在蒸汽壓力1.1kg/cm²壓力下滅菌30分鐘；

所述的麥麩為新鮮小麥麩皮，其中質量含量包括：粗蛋白＞13％，粗纖維＜10％，粗灰分＜6.0％，水分＜13％；

所述的玉米粉為新鮮玉米粉，其中質量含量包括：粗蛋白＞8％，粗纖維＜5.0％，粗灰分＜26％，水分＜14.0％；

所述的豆粕為新鮮豆餅，其中質量含量包括：粗蛋白＞40.0％，粗脂肪＜8.0％，粗纖維＜6.0％，粗灰分＜7.0％，水分＜13.0％；

（3）、接種：將斜面培養基種子接種于固體發酵培養基中，接種量為固體發酵培養基重量的0.3%；

（4）、發酵培養：將接種斜面培養基種子的固體發酵培養基在35-40℃，培養22-26小時，第一次搖動，繼續培養22-26小時，第二次搖動，經過48-60小時待菌絲布滿培養基表面，孢子全部變黑為止，低溫保存備用；將孢子全部變黑的黑曲霉每1kg菌種接種到裝有300kg固體發酵培養基中，在35-40℃下培養22-26小時，第一次翻曲，繼續在35-40℃下培養22-26小時，第二次翻曲后，繼續培養11-13小時，待在培養基上長出的白色菌絲將要變化成黑色孢子時，低于60℃進行干燥，當含水率10%以下，粉碎成過60目篩的粉狀物，即為飼用酸性蛋白酶。