[發(fā)明專(zhuān)利]一種基于熒光共振能量轉(zhuǎn)移的二氧化硅熒光免疫標(biāo)記探針、制備方法及應(yīng)用

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• 申請(qǐng)日: 2017-11-18
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107976538A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-05-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張明翠;閆希
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 安徽師范大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/533
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/533;G01N21/64
• 代理公司: 蕪湖安匯知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司34107
• 代理人: 任晨晨

1.一種基于熒光共振能量轉(zhuǎn)移的二氧化硅熒光免疫標(biāo)記探針的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括以下步驟：

1)、將十六烷基三甲基溴化銨CTAB溶于去離子水；

2)、加入乙二醇和氨水；

3)、之后加入正硅酸乙酯TEOS反應(yīng)；

4)、然后，再加入混合好的BODIPY溶液和羅丹明B溶液，再加入三甲氧基甲基硅烷MTMS，反應(yīng)；

5)、再加入3-氨丙基三乙氧基硅烷APTES繼續(xù)反應(yīng)；離心洗滌，冷凍干燥，得RB-BODIPY-FRET二氧化硅納米粒子，即為基于熒光共振能量轉(zhuǎn)移的二氧化硅熒光免疫標(biāo)記探針。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，從步驟1)開(kāi)始，全程均在60-70℃條件下反應(yīng)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的制備方法，其特征在于，步驟3)中加入乙二醇和氨水后3-6min內(nèi)加入正硅酸乙酯TEOS；反應(yīng)時(shí)間為30-60min。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的制備方法，其特征在于，步驟4)所述反應(yīng)時(shí)間為2-4h。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4所述的制備方法，其特征在于，步驟5)所述反應(yīng)時(shí)間為1-2h。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-4所述的制備方法，其特征在于，步驟4)混合前BODIPY溶液濃度為0.001mmol/mL-0.006mmol/mL；混合前羅丹明B溶液濃度為0.001mmol/mL-0.006mmol/mL；混合后BODIPY和羅丹明B摩爾比為1:1。

7.根據(jù)權(quán)利要求1-6所述的制備方法，其特征在于，所述制備方法具體包括以下步驟：

1)、在60-70℃下將十六烷基三甲基溴化銨CTAB 0.03-0.08g在磁力攪拌條件下溶于30-70mL去離子水中；

2)、隨后在60-70℃下加入0.4-0.7mL乙二醇和2-3mL氨水；

3)、加入乙二醇和氨水后的3-6min內(nèi)加入正硅酸乙酯TEOS 100-200μL反應(yīng)30-60min；

4)、加入1ml BODIPY溶液和羅丹明B的混合溶液及0.02-0.05mL三甲氧基甲基硅烷MTMS，反應(yīng)2-4h；

5)、再加入0.06-0.1mL的3-氨丙基三乙氧基硅烷APTES繼續(xù)反應(yīng)1-2h；

完成反應(yīng)后攪拌冷卻至室溫，離心洗滌2-4次，冷凍干燥得RB-BODIPY-FRET二氧化硅納米粒子，避光密封保存。

8.一種采用權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)所述方法制備得到基于熒光共振能量轉(zhuǎn)移的二氧化硅熒光免疫標(biāo)記探針。

9.一種權(quán)利要求8所述的基于熒光共振能量轉(zhuǎn)移的二氧化硅熒光免疫標(biāo)記探針偶聯(lián)抗體的應(yīng)用。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于，具體應(yīng)用方法為：

a、將抗體溶解到醋酸緩沖液中，再加入過(guò)碘酸鈉溶液，于4℃避光攪拌進(jìn)行氧化，超濾除去未反應(yīng)的過(guò)碘酸鈉，得到氧化抗體；

b、將上述制備的基于熒光共振能量轉(zhuǎn)移的二氧化硅熒光免疫標(biāo)記探針清洗后分散到PBS緩沖溶液中；在攪拌下加入步驟a制備的氧化抗體，于4℃下避光攪拌；

c、最后，加入硼氫化鈉溶液繼續(xù)4℃避光攪拌，將反應(yīng)后的溶液離心洗滌，分散到PBS緩沖溶液中，4℃儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?!-- SIPO -->