[發(fā)明專利]一種同時(shí)檢測(cè)多種遺傳代謝疾病相關(guān)物質(zhì)的方法和試劑盒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711147042.8
• 申請(qǐng)日: 2017-11-17
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108051494A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-05-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 饒維橋;陳曉敏;廖文麗;廖云莉;盧鵬飛;林梁;訾金
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深圳華大生命科學(xué)研究院
• 主分類號(hào): G01N27/62
• 分類號(hào): G01N27/62;G01N33/74;G01N33/68;G01N33/64
• 代理公司: 深圳鼎合誠(chéng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44281
• 代理人: 彭家恩;羅瑤

本申請(qǐng)公開(kāi)了一種同時(shí)檢測(cè)多種遺傳代謝疾病相關(guān)物質(zhì)的方法和試劑盒。本申請(qǐng)方法包括(1)直接在混合內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品中加有機(jī)溶劑或加有機(jī)溶劑和琥珀酰丙酮處理液，制成提取工作液；(2)用提取工作液孵育待測(cè)血斑樣本；(3)離心，取上清液，用串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)；混合內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品包括氨基酸、肉堿和17α羥孕酮的同位素內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品；琥珀酰丙酮處理液中含琥珀酰丙酮內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品和水合肼。本申請(qǐng)方法，一次采血就可實(shí)現(xiàn)四大類物質(zhì)同時(shí)檢測(cè)，一次性檢13種氨基酸、32種肉堿、1種激素和1種酮類，能篩查46種遺傳性代謝疾病，提升了新生兒篩查效率。本申請(qǐng)?jiān)噭┖袑⑺型凰貎?nèi)標(biāo)準(zhǔn)品加在一起使用，避免內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品單獨(dú)加入的誤差和失誤，保障了檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性。

技術(shù)領(lǐng)域

本申請(qǐng)涉及遺傳代謝疾病相關(guān)物質(zhì)檢測(cè)領(lǐng)域，特別是涉及一種同時(shí)檢測(cè)多種遺傳代謝疾病相關(guān)物質(zhì)的方法和試劑盒。

背景技術(shù)

先天性代謝異常(inborn error of metabolism)又稱為遺傳代謝病(inheritedmetabolic disorders)是一類由于基因突變所導(dǎo)致的可對(duì)新生兒內(nèi)臟、神經(jīng)、肌肉、骨骼和皮膚等全身多系統(tǒng)組織和器官產(chǎn)生嚴(yán)重危害的代謝性疾病。在我國(guó)，每年患有出生缺陷的新生兒大約有80-120萬(wàn)，其中遺傳代謝性疾病患兒約占50％。多年實(shí)踐證明，對(duì)新生兒遺傳代謝性疾病的早期篩查和早期干預(yù)能夠?qū)τ行Х乐箖和橇Φ拖拢岣呷丝诔錾|(zhì)量，且具有良好的社會(huì)和經(jīng)濟(jì)效益。

現(xiàn)有應(yīng)用的新生兒代謝性疾病篩查技術(shù)有細(xì)菌抑制法、放射免疫法、熒光法等傳統(tǒng)的遺傳代謝病篩查技術(shù)，這些方法一次只能篩查一種疾病。串聯(lián)質(zhì)譜(MS/MS)具有超高靈敏性、高特異性、高選擇性和快速檢驗(yàn)，可以在1-2分鐘內(nèi)對(duì)同一個(gè)樣本的多種代謝物進(jìn)行同時(shí)檢測(cè)，可以對(duì)氨基酸代謝障礙性疾病，脂肪酸代謝障礙性疾病，有機(jī)酸代謝障礙性疾病，激素代謝障礙性疾病等多種類型的遺傳代謝病疾病進(jìn)行篩查。并且，由于質(zhì)譜是直接對(duì)代謝物進(jìn)行檢測(cè)，能夠大大降低篩查假陽(yáng)性和假陰性的發(fā)生率。

國(guó)際上已經(jīng)有美國(guó)PerkinElmer公司開(kāi)發(fā)的“非衍生化多種氨基酸、肉堿和琥珀酰丙酮測(cè)定試劑盒(串聯(lián)質(zhì)譜法)”；國(guó)內(nèi)有廣州豐華生物工程有限公司開(kāi)發(fā)的“非衍生化多種氨基酸、肉堿和琥珀酰丙酮測(cè)定試劑盒(串聯(lián)質(zhì)譜法)”，及浙江大學(xué)開(kāi)發(fā)的“氨基酸與肉毒堿串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)試劑盒”。

無(wú)論是國(guó)際還是國(guó)內(nèi)的測(cè)定試劑盒，都存在如下不足：

A、只能一次性檢測(cè)部分氨基酸、肉堿和琥珀酰丙酮，而激素類的檢測(cè)指標(biāo)需要單獨(dú)采樣，單獨(dú)檢測(cè)；

B、新生兒篩查衍生化路線需使用酰氯，會(huì)對(duì)環(huán)境造成污染；

C、在檢測(cè)氨基酸和肉堿相關(guān)的疾病、先天性腎上腺皮質(zhì)增生癥的時(shí)候，需要待檢者兩次采血，多一次采血對(duì)待測(cè)者容易造成身心影響；

D、在試驗(yàn)過(guò)程中，通常都是先將內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品制成內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液，然后再由內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液配制提取工作液，在內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品比較多的情況下，這兩個(gè)步驟十分耗費(fèi)實(shí)驗(yàn)人員的時(shí)間和精力；而且在分析物進(jìn)行相對(duì)定量時(shí)，由于各個(gè)內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品都是單獨(dú)加入提取工作液中的，而每次操作都不可避免的存在操作誤差，從而影響分析物濃度的準(zhǔn)確性和檢測(cè)的可重復(fù)性；并且，在眾多內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品單獨(dú)加入提取工作液的過(guò)程中，還可能會(huì)出現(xiàn)操作失誤，例如誤加或少加某個(gè)或某幾個(gè)內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品，從而導(dǎo)致錯(cuò)誤的檢測(cè)結(jié)果。

發(fā)明內(nèi)容

本申請(qǐng)的目的是提供一種改進(jìn)的同時(shí)檢測(cè)多種遺傳代謝疾病相關(guān)物質(zhì)的方法和試劑盒。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本申請(qǐng)采用了以下技術(shù)方案：

本申請(qǐng)的一方面公開(kāi)了一種同時(shí)檢測(cè)多種遺傳代謝疾病相關(guān)物質(zhì)的方法，其中，多種遺傳代謝疾病相關(guān)物質(zhì)包括氨基酸、肉堿、酮類、激素；該方法包括以下步驟，

(1)提取工作液的制備：直接在混合內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品中加入有機(jī)溶劑，或者加入有機(jī)溶劑和琥珀酰丙酮處理液，混合均勻，制成提取工作液；