[發(fā)明專利]腎損傷因子1檢測試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711145688.2
• 申請日: 2017-11-17
• 公開（公告）號: CN107942072A
• 公開（公告）日: 2018-04-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王保君;湯雙雙;歐衛(wèi)軍;唐啟偉;徐艷
• 申請（專利權(quán)）人: 南通伊仕生物技術(shù)股份有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/543
• 代理公司: 北京三聚陽光知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司11250
• 代理人: 曹治麗

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物檢測領(lǐng)域，具體涉及一種腎損傷因子1檢測試劑盒。

背景技術(shù)

急性腎損傷(Acutekidneyinjury，AKI)是由多種原因引起的，可發(fā)生在各種臨床情況下的一種復(fù)雜的腎功能減退綜合征。它可以表現(xiàn)為血肌酐水平的輕微升高，也可以表現(xiàn)為急性腎衰竭。研究發(fā)現(xiàn)，AKI的發(fā)生與病死率的增加密切相關(guān)。這就要求醫(yī)師在臨床工作中能早期診斷，最好在腎小球?yàn)V過率開始下降，或者僅有組織損傷而腎小球?yàn)V過率尚正常的階段及時(shí)發(fā)現(xiàn)并干預(yù)，以改善預(yù)后、降低病死率。血肌酐和尿量是目前AKI的診斷指標(biāo)，但受到很多因素影響，敏感性和特異性都不高。因AKI診斷滯后，常貽誤治療的最佳時(shí)期。尋求具有高敏感性、特異性、易檢測的新的生物標(biāo)志物已經(jīng)成為當(dāng)前研究熱點(diǎn)之一。

腎損傷因子1(Kidneyinjurymolecμle-1，KIM-1)是一種黏附分子，可能是一種新的免疫球蛋白超家族的一員。采用基因芯片技術(shù)研究發(fā)現(xiàn)，KIM-1基因是大鼠缺血/再灌注模型腎臟中表達(dá)最顯著的基因。近年的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，KIM-1可能較其他標(biāo)志物更為敏感。生理情況下，KIM-1僅在肝、腎、脾中有微弱表達(dá),而在AKI時(shí)其表達(dá)顯著增強(qiáng)。人類及嚙齒類動(dòng)物的近端腎小管損傷后，位于胞外的KIM-1蛋白脫落進(jìn)入尿液。越來越多的研究已經(jīng)在各種缺血、腎毒性和腎移植等所致AKI的動(dòng)物模型中證實(shí)KIM-1可以作為早期、無創(chuàng)和特異的AKI診斷標(biāo)志物。KIM-1作為新的候選AKI早期診斷標(biāo)志物，有其優(yōu)勢：①敏感性高，其在正常組織不表達(dá)，AKI發(fā)生時(shí)，其在近端小管上皮細(xì)胞的表達(dá)才顯著上調(diào)，并一直持續(xù)到細(xì)胞完全康復(fù)；②特異性很高，特別是對缺血性或腎毒性AKI特異性更高，在其他器官(在近年文獻(xiàn)中僅發(fā)現(xiàn)有卵巢透明細(xì)胞癌時(shí)KIM-1升高的報(bào)道)很少表達(dá)；③其胞外部分脫落進(jìn)入尿液后性質(zhì)比較穩(wěn)定，容易檢測；④極少受到慢性腎臟疾病和尿路感染的影響。

中國專利CN104730250A公開了一種人腎損傷分子的酶聯(lián)免疫試劑盒，包括識別人腎損傷分子不同表位的單克隆抗體分別作為捕獲抗體和檢測抗體，以重組表達(dá)的人腎損傷分子作為抗原標(biāo)準(zhǔn)品。檢測方法為：尿液樣本先離心處理，取上清液，捕獲抗體與上清液結(jié)合，形成捕獲抗體-KIM1復(fù)合物，在加入檢測抗體，與上述復(fù)合結(jié)合形成檢測抗體-捕獲抗體-KIM1復(fù)合物，加入顯色液進(jìn)行顯色，通過酶標(biāo)儀在450nm波長下檢測發(fā)光值，計(jì)算樣品中KIM-1的含量。該試劑盒檢測時(shí)長至少三小時(shí)，檢測時(shí)長太長，無法滿足目前臨床需求。

發(fā)明內(nèi)容

因此，本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是現(xiàn)有技術(shù)中檢測腎損傷因子1檢測時(shí)長太長的缺陷。進(jìn)而提供一種檢測快速且靈敏度高的檢測腎損傷因子1的檢測試劑盒。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

一種腎損傷因子1檢測試劑盒，包括

第一儲(chǔ)液組件，用于儲(chǔ)存KIM-1校準(zhǔn)品；

第二儲(chǔ)液組件，用于儲(chǔ)存酶結(jié)合物工作液；

第三儲(chǔ)液組件，用于儲(chǔ)存磁珠工作液；

第四儲(chǔ)液組件，用于儲(chǔ)存清洗液；

第五儲(chǔ)液組件，用于儲(chǔ)存底物溶液；

第六儲(chǔ)液組件，用于儲(chǔ)存前處理試劑；

第七儲(chǔ)液組件，用于存儲(chǔ)KIM-1質(zhì)控品。

可選的，所述磁珠工作液包括標(biāo)記有KIM-1抗體的羧基磁珠；所述磁珠的粒徑為1-5μm。

可選的，所述標(biāo)記有KIM-1抗體的羧基磁珠的濃度為0.1～1mg/ml。

可選的，所述酶結(jié)合物工作液包括堿性磷酸酶標(biāo)記的抗KIM-1抗體。

可選的，所述堿性磷酸酶標(biāo)記的抗KIM-1抗體的濃度為0.5～2μg/ml。

可選的，所述KIM-1校準(zhǔn)品和所述KIM-1質(zhì)控品是含有KIM-1抗原的HEPES溶液。

可選的，所述底物溶液為酶促化學(xué)發(fā)光底物溶液。

可選的，所述前處理試劑是包括NaCl、蔗糖、甘油、吐溫20以及防腐劑的緩沖液。

本發(fā)明還提供一種檢測腎損傷因子1的方法，使用所述的腎損傷因子1檢測試劑盒檢測，包括如下步驟：

(1)將待測樣本、KIM-1校準(zhǔn)品以及KIM-1質(zhì)控品分別加入到前處理試劑中，混勻后加入磁珠工作液、酶結(jié)合物工作液，混勻后37℃-42℃反應(yīng)5min-10min，得到第一反應(yīng)液；

(2)將所述第一反應(yīng)液進(jìn)行磁分離，收集磁珠；通過清洗液清洗所述磁珠；

(3)在清洗后的所述磁珠中加入底物溶液，得到混合液；檢測所述混合液的發(fā)光強(qiáng)度。