[發明專利]一種細胞反應器微載體細胞收獲及再接種放大方法

有效

• 申請號: 201711145596.4
• 申請日: 2017-11-17
• 公開（公告）號: CN109797101B
• 公開（公告）日: 2022-03-04
• 發明（設計）人: 朱希燦
• 申請（專利權）人: 北京中源合聚生物科技有限公司
• 主分類號: C12M3/00
• 分類號: C12M3/00;C12M1/12;C12M1/00
• 代理公司: 北京智行陽光知識產權代理事務所(普通合伙) 11738
• 代理人: 黃錦陽

本發明提供一種細胞反應器微載體細胞收獲及再接種放大方法，包括步驟101：將微載體細胞過濾收集；步驟102：培養基去除緩沖液平衡；步驟103：胰酶消化；步驟104：細胞微載體分離，只收集細胞或加入下一級微載體接種放大。本發明解決了生產規模微載體收集，細胞可控消化，以及細胞收獲微載體分離，球轉球放大的問題。本發明的方法適合貼壁細胞制備生產，應用于疫苗、重組蛋白及生物酶中試及生產，并且本方法簡單經濟。

技術領域

本發明屬于細胞反應器大規模微載體細胞培養放大工藝，尤其涉及的5 是一種細胞反應器微載體細胞收獲及再接種放大方法。

背景技術

微載體細胞反應器懸浮培養制備病毒疫苗，是WHO和CFDA推薦疫苗生產模式。國外用于細胞流感疫苗生物反應器體積已超過6000L,國內微載體懸浮培養反應器也超過300L。微載體懸浮培養雖然具有自動化便于監控穩定重復生產過程等優點，但放大過程需要將細胞從微載體上消化下來，然后將細胞和舊微載體與下一級培養新微載體共同進入下一級反應器中，形象說是細胞球轉球或倒罐。生產放大方式是反應器停止攪拌，微載體自然沉降，吸出多余培養液，加入胰酶靜置消化后，加入胰酶滅活劑后共同推入下一級反應器。為接種下一級微載體需要保持細胞活性狀態，而微載體靜置導致細胞缺氧，胰酶消化的時間控制不好損傷細胞。

目前現有的ThermoFisher公司有收集微載體細胞的商品細胞收集袋出售，主要用于幾十升實驗及中試規模，收集袋腔體小，微載體容易堵塞堆積，消化好的細胞不能全部透出收集，并且此收集袋不透氣，細胞消化過程需要控制，防止細胞缺氧。

因此，為實現疫苗生產安全放大，提高工藝可靠性和可重復，提高細胞收率克服現有技術缺陷，發明微載體球轉球消化放大方法。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是針對現有技術的不足，提供一種細胞反應器微載體細胞收獲及再接種放大方法。

本發明的技術方案如下：

一種細胞反應器微載體細胞收獲及再接種放大方法，包括以下步驟：

步驟101：將微載體細胞過濾收集；

步驟102：培養基去除緩沖液平衡；

步驟103：胰酶消化；

步驟104：細胞微載體分離，只收集細胞或加入下一級微載體接種放大。

所述的方法，所述步驟101中，將微載體細胞過濾收集是指：把種子細胞反應器中微載體連同貼附于微載體上處于對數生長期的細胞，通過蠕動泵轉移到可搖動微載體細胞分離腔體中；微載體截留濾網,阻擋微載體和細胞，培養基及細胞碎片透過微載體截留濾網，無菌空氣吹干。

所述的方法，所述步驟102中，所述培養基去除緩沖液平衡是指：在搖動狀態下用無鈣鎂離子緩沖液沖洗微載體中殘存的血清和胰酶抑制劑。

所述的方法，所述步驟103中，胰酶消化是指：加入胰酶消化隨后搖動濾器使細胞與微載體分離，隨后用含血清的培養基反向沖洗同時滅活胰酶。

所述的方法，所述步驟104中，細胞微載體分離，只收集細胞或加入下一級細胞反應器接種放大是指：通過消化后細胞收獲濾網只收集從出口出來的細胞；搖動狀態下，微載體比重大于細胞，從下向上培養基帶著細胞透出細胞收獲濾網，作為種子進入下一級細胞反應器。

本發明解決生產規模微載體收集，細胞可控消化，以及細胞收獲微載體分離，球轉球放大的問題。本方法適合貼壁細胞制備生產，應用于疫苗、重組蛋白及生物酶中試及生產，并且本方法簡單經濟。

附圖說明

圖1為本發明實施例１中細胞反應器微載體細胞收獲及再接種放大裝置的結構示意圖。

圖2為本發明的方法流程圖。

具體實施方式