[發明專利]一種細胞反應器微載體細胞收獲及再接種放大方法

有效

• 申請號: 201711145596.4
• 申請日: 2017-11-17
• 公開（公告）號: CN109797101B
• 公開（公告）日: 2022-03-04
• 發明（設計）人: 朱希燦
• 申請（專利權）人: 北京中源合聚生物科技有限公司
• 主分類號: C12M3/00
• 分類號: C12M3/00;C12M1/12;C12M1/00
• 代理公司: 北京智行陽光知識產權代理事務所(普通合伙) 11738
• 代理人: 黃錦陽

1.一種細胞反應器微載體細胞收獲及再接種放大方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟101：將微載體細胞過濾收集；

步驟102：培養基去除緩沖液平衡；

步驟103：胰酶消化；

步驟104：細胞微載體分離，只收集細胞或加入下一級微載體接種放大；

所述步驟101中，將微載體細胞過濾收集是指：把種子細胞反應器中微載體連同貼附于微載體上處于對數生長期的細胞，通過蠕動泵轉移到可搖動微載體細胞分離腔體中；可搖動微載體細胞分離腔體中，設置有微載體截留濾網和消化后細胞收獲濾網；所述微載體截留濾網，用于阻擋截留微載體和細胞以及培養基及細胞碎片；所述消化后細胞收獲濾網，用于只收集細胞；微載體截留濾網,阻擋微載體和細胞，培養基及細胞碎片透過微載體截留濾網，無菌空氣吹干；所述微載體截留濾網上的孔徑為10-30um纖維素濾板，采用搖動過濾的方式，阻擋微載體和貼附細胞，濾除培養基中的血清及細胞碎片；可搖動微載體細胞分離腔體為316不銹鋼制作直徑為60cm，高為10cm容納不大于20L微載體和細胞，底部設置有微載體截留濾網，頂部設置有消化后細胞收獲濾網；

所述步驟102中，所述培養基去除緩沖液平衡是指：在搖動狀態下用無鈣鎂離子緩沖液沖洗微載體中殘存的血清和胰酶抑制劑；

所述步驟103中，胰酶消化是指：加入胰酶消化隨后搖動濾器使細胞與微載體分離，隨后用含血清的培養基反向沖洗同時滅活胰酶；

所述步驟104中，細胞微載體分離，只收集細胞或加入下一級細胞反應器接種放大是指：通過消化后細胞收獲濾網只收集從出口出來的細胞；搖動狀態下，微載體比重大于細胞，從下向上培養基帶著細胞透出細胞收獲濾網，作為種子進入下一級細胞反應器；消化后細胞收獲濾網為316不銹鋼濾網100um；細胞平均粒徑10um,微載體粒徑100-300um；消化后的細胞透過細胞收獲濾網，而微載體截留，在搖動混合狀態下，液流向上分離狀態，細胞收率高于向下過濾收獲狀態。