[發明專利]一種抗VEGF基因、及利用其修飾的T細胞、制備方法和應用

有效

• 申請號: 201711145502.3
• 申請日: 2017-11-17
• 公開（公告）號: CN108034669B
• 公開（公告）日: 2021-07-30
• 發明（設計）人: 劉明錄;強邦明;王立新;張傳鵬;金海鋒;韓慶梅;劉敏;王亮
• 申請（專利權）人: 山東興瑞生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/62
• 分類號: C12N15/62;C12N5/10;C12N15/867;A61K35/17;A61P35/00
• 代理公司: 山東華君知識產權代理有限公司 37300
• 代理人: 呂翠蓮

一種抗VEGF基因、及利用其修飾的T細胞、制備方法和應用，該基因由導引子、VEGF抗原結合區、CD3抗原結合區、CD8的Hinge區、CD8的跨膜區與共刺激分子依序串聯組成。本發明中修飾的T細胞增殖速度快、具有識別腫瘤的機制、殺瘤譜廣、典型的個性化生物治療模型。

技術領域

本發明涉及基因技術領域，尤其涉及一種抗VEGF基因、及利用其修飾的T細胞、制備方法和應用。

背景技術

血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)，是血管內皮細胞特異性的肝素結合生長因子，可在體內誘導血管新生。它由某些腫瘤細胞分泌，通過與血管內皮上的相應受體結合促進內皮細胞增殖，同時可增加血管通透性使內皮細胞遷移，誘導腫瘤血管生成，維持腫瘤的繼續生長，是目前發現的最強烈的血管生成因子，與諸多生理及病理過程有關。

人VEGF基因定位于染色體6p21.3，為單一基因，全長14kb，由8個外顯子、7個內顯子組成。編碼產物為34～45kD的同源二聚體糖蛋白。VEGF介導了許多生理性和病理性的血管生成,在組織血管增生時,其表達也增強。胚胎發育的組織處于分化狀態下的細胞其表達高于成年和已分化完全的細胞。生理狀態下，VEGF可高水平地表達于胎盤,許多胚胎組織和一些有生理性血管增生的成人正常組織(如增生期子宮內膜)。此外,在動物和成人的正常腎小球細胞、心肌細胞、前列腺上皮、精液及腎上腺皮質和肺的某些上皮細胞也有低水平表達。病理狀態下，在愈合中的皮膚傷口、銀屑病、遲發性過敏反應、類風濕性關節炎的滑膜層細胞中均有VEGF的過度表達。

由于VEGF能夠為腫瘤提供營養，維持腫瘤繼續增長，所以VEGF成為治療實體瘤的重要靶點。因此，開發一種抗VEGF基因、及利用其修飾的T細胞、制備方法和應用，不但具有迫切的研究價值，也具有良好的經濟效益和醫用潛力，這正是本發明得以完成的動力所在和基礎。

發明內容

為了克服上述所指出的現有技術的缺陷，本發明人對此進行了深入研究，在付出了大量創造性勞動后，從而完成了本發明。

具體而言，本發明所要解決的技術問題是：提供一種抗VEGF基因、及利用其修飾的T細胞、制備方法和應用。

為解決上述技術問題，本發明的技術方案是：

第一方面，本發明提供了一種抗VEGF基因，其基因片段為序列表SEQ.ID.NO.1所示的核苷酸序列。

本發明中，作為優選的技術方案，所述抗VEGF基因(又稱AntiVEGF-CD3融合基因)由導引子、VEGF抗原結合區、CD3抗原結合區、CD8的Hinge區、CD8的跨膜區與共刺激分子依序串聯組成；其中，所述共刺激分子包括4-1BB胞內區和CD3ζ胞內區的共刺激分子。

本發明中，作為優選的技術方案，所述

導引子的核苷酸序列為SEQ ID NO.2；

VEGF抗原結合區的核苷酸序列為SEQ ID NO.3；

CD3抗原結合區的核苷酸序列為SEQ ID NO.4；

CD8Hinge區的核苷酸序列為SEQ ID NO.5；

CD8跨膜區的核苷酸序列為SEQ ID NO.6；

4-1BB胞內區的核苷酸序列為SEQ ID NO.7；

CD3ζ胞內區的核苷酸序列為SEQ ID NO.8。

第二方面，本發明提供了利用所述抗VEGF基因修飾的T細胞，所述T細胞為單核細胞誘導的異質T細胞，且經過攜帶有所述抗VEGF基因的慢病毒感染得到。

第三方面，本發明提供了該T細胞的制備方法，包括如下步驟：