[發明專利]一種重組抗TNF-α全人源單克隆抗體的制備方法在審
| 申請號： | 201711144785.X | 申請日： | 2017-11-17 |
| 公開（公告）號： | CN108164601A | 公開（公告）日： | 2018-06-15 |
| 發明（設計）人： | 王強 | 申請（專利權）人： | 安徽未名生物醫藥有限公司 |
| 主分類號： | C07K16/24 | 分類號： | C07K16/24;C12N15/85;C12N5/10 |
| 代理公司： | 合肥市長遠專利代理事務所(普通合伙) 34119 | 代理人： | 楊霞;翟攀攀 |
| 地址： | 230000 安徽省合肥市巢湖經濟*** | 國省代碼： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 單克隆抗體 制備 轉染宿主細胞 分離純化 核酸序列 構建 真核表達載體 生產周期 倉鼠 偏愛密碼子 無血清培養 技術培養 設計合成 細胞克隆 高表達 高純度 細胞庫 細胞株 輕鏈 重鏈 合成 篩選 | ||
1.一種重組抗TNF-α全人源單克隆抗體的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
a)合成重組抗TNF-α全人源單克隆抗體的核酸序列；重組抗TNF-α全人源單克隆抗體具有輕鏈和重鏈，其中輕鏈的核酸序列如SEQ ID NO.1所示，輕鏈的氨基酸序列如SEQ IDNO.3所示；重鏈的可變區的核酸序列如SEQ ID NO.2所示，重鏈的可變區的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示；
b)利用步驟a)所得重組抗TNF-α全人源單克隆抗體的核酸序列構建載體pHL101-GS/Neo，轉染宿主細胞，篩選高表達的細胞克隆，建立細胞庫；
c)利用步驟b)所得細胞株進行培養，分離純化，獲得重組抗TNF-α全人源單克隆抗體。
2.根據權利要求1所述重組抗TNF-α全人源單克隆抗體的制備方法，其特征在于，步驟a)中，采用中國倉鼠卵巢細胞的偏愛密碼子合成重組抗TNF-α全人源單克隆抗體的核酸序列。
3.根據權利要求1所述重組抗TNF-α全人源單克隆抗體的制備方法，其特征在于，步驟b)中，所述構建載體過程中，包括構建表達重鏈的載體、構建表達輕鏈的載體、構建雙真核啟動子驅動表達重鏈和輕鏈的載體。
4.根據權利要求3所述重組抗TNF-α全人源單克隆抗體的制備方法，其特征在于，步驟b)中，構建表達重鏈的載體的過程中，采用雙BbsⅠ結構的酶切位點進行酶切連接。
5.根據權利要求1所述重組抗TNF-α全人源單克隆抗體的制備方法，其特征在于，步驟b)中，宿主細胞為GS缺陷型細胞CHO-GS-。
6.根據權利要求1所述重組抗TNF-α全人源單克隆抗體的制備方法，其特征在于，步驟c)中，采用無血清、分批補料培養的方式培養宿主細胞。
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