[發明專利]一種基于多克隆抗體的免疫比濁法測定載脂蛋白用的R2試劑及試劑盒

在審

• 申請號: 201711142847.3
• 申請日: 2017-11-17
• 公開（公告）號: CN107966575A
• 公開（公告）日: 2018-04-27
• 發明（設計）人: 陸大偉
• 申請（專利權）人: 安徽大千生物工程有限公司
• 主分類號: G01N33/92
• 分類號: G01N33/92
• 代理公司: 合肥市上嘉專利代理事務所(普通合伙)34125
• 代理人: 姜玲燕,王偉

技術領域

本發明涉及載脂蛋白測定技術領域，具體地說涉及一種基于多克隆抗體的免疫比濁法測定載脂蛋白用的R2試劑及試劑盒。

背景技術

載脂蛋白是血漿中脂蛋白的組成成分，主要分A、B、C、D、E五類，基本功能是運載脂類物質及穩定脂蛋白的結構，某些載脂蛋白還有激活脂蛋白代謝酶、識別受體等功能。載脂蛋白對脂蛋白的結構、功能和代謝至關重要，為診斷脂質代謝疾病提供有價值的指標。

目前測定載脂蛋白的方法主要有熒光免疫測定法、酶免疫分析法、酶聯免疫法以及免疫比濁法，少量使用單克隆抗體ELISA夾心法。其中，熒光免疫測定法較酶免疫分析法檢測線性范圍寬，精密度好，但需專門的檢測儀器，檢測成本較高；酶聯免疫法靈敏度高，但是操作繁瑣，用時較長，難以用于大規模自動化檢測；ELISA法檢測靈敏度較高，但是儀器價格較高，也不適用于全自動檢測。

而免疫比濁法因其靈敏度高，檢測線性范圍寬，且操作簡便，易操作，自動化程度高，可用于全自動生化分析儀的優點，成為臨床測定首選方法，與其他方法檢測試劑比較，通用性較強。免疫比濁法應用原理是標本中的載脂蛋白特異地與羊抗人抗體反應，形成不溶性的復合物，引起濁度增加，可根據該不溶性復合物的濁度測定出樣本中載脂蛋白的濃度。

免疫比濁法可以使用單克隆抗體或多克隆抗體，使用單克隆抗體，雖然雜蛋白較少，試劑能長期保存，但價格昂貴，因此，目前市場上載脂蛋白測定試劑盒(免疫比濁法)大都采用多克隆抗體，多克隆抗體雖然價格便宜，但是由于現在上游原料載脂蛋白多克隆抗體純化技術不夠成熟，導致獲取不到較為純凈的多克隆抗體，雜蛋白較多，免疫試劑在雜蛋白過多的情況下，會加速試劑的變質，不利試劑長期保存。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種基于多克隆抗體的免疫比濁法測定載脂蛋白用的R2試劑及試劑盒。

為了解決上述技術問題，本發明采用如下技術方案：一種基于多克隆抗體的免疫比濁法測定載脂蛋白用的R2試劑，按以下方法制備而成：將TRIS加入到水中，調節pH至7.4～7.5，然后加入NaCl、EDTA-Na2、聚乙二醇6000、載脂蛋白多克隆抗體、PC300，加水定容，得到初配液，然后對初配液進行密封靜置處理，再對經過密封靜置處理的初配液進行去除固體雜質處理，得到所述基于多克隆抗體的免疫比濁法測定載脂蛋白用的R2試劑。

進一步地，初配液中，各原料的含量為：TRIS 20～100mmol/L、NaCl 6.5～9.0g/L、EDTA-Na2 0.1～0.4g/L、聚乙二醇6000 20～40g/L、載脂蛋白多克隆抗體80～200ml/L、PC300 0.9～1ml/L。

進一步地，密封靜置處理的環境溫度為2～8℃，時間為10～15d。在實施本發明的過程中，發明人發現，本發明的R2試劑在2～8℃密封狀態下最適長期保存，因剛配制成的初配液含有大量的雜蛋白，靜置10～15d可使體積較大的雜蛋白能更好地在聚乙二醇6000促聚下形成沉淀，有利于下一步過濾，不易堵塞過濾膜。

進一步地，去除固體雜質處理的具體步驟為：對經過密封靜置處理的初配液進行初次抽濾，得到初濾液，對初濾液進行離心處理，取上清液，最后對上清液進行二次抽濾。在實施本發明的過程中，發明人發現，使用這種方法能夠過濾掉體積較小的雜蛋白，且在過濾的過程中不易堵塞過濾膜，在工藝上更具有可操作性。

進一步地，所述R2試劑用于測定載脂蛋白A2，所述載脂蛋白多克隆抗體為載脂蛋白A2多克隆抗體，初配液中，各原料的含量為：TRIS 50～100mmol/L、NaCl 6.5～8.0g/L、EDTA-Na2 0.1～0.4g/L、聚乙二醇6000 20～30g/L、載脂蛋白多克隆抗體120～180ml/L、PC300 0.9～1ml/L。在實施本發明的過程中，發明人發現，用于測定載脂蛋白A2時，各原料的含量具體選擇在上述范圍，試劑的保存時間更長，而且檢測準確性也較好。

進一步地，所述R2試劑用于測定載脂蛋白C2，所述載脂蛋白多克隆抗體為載脂蛋白C2多克隆抗體，初配液中，各原料的含量為：TRIS 20～50mmol/L、NaCl 6.5～8.0g/L、EDTA-Na2 0.1～0.4g/L、聚乙二醇6000 20～40g/L、載脂蛋白多克隆抗體80～120ml/L、PC300 0.9～1ml/L。在實施本發明的過程中，發明人發現，用于測定載脂蛋白C2時，各原料的含量具體選擇在上述范圍，試劑的保存時間更長，而且檢測準確性也較好。