[發明專利]黃精實體小分子肽的提取工藝

在審

• 申請號: 201711139537.6
• 申請日: 2017-11-16
• 公開（公告）號: CN108034682A
• 公開（公告）日: 2018-05-15
• 發明（設計）人: 周艷初
• 申請（專利權）人: 金華市艾力生物科技有限公司
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K1/34
• 代理公司: 北京華仲龍騰專利代理事務所(普通合伙) 11548
• 代理人: 李靜

1.黃精實體小分子肽的提取工藝，包括：脫脂、初次酶解、二次酶解、純化，其特征在于：所述二次酶解步驟為：將初次酶解液降溫至35-37℃，調節pH為2.2-3.5，加入3000-3300U/g胃蛋白酶水解10-15分鐘，加入（S）-1-氨基-2-羥甲基二氫吲哚，繼續反應15-20分鐘，酶解過程中以雙頻率復合超聲與微波輻射交替間隔輔助酶解，酶解完成后滅酶，靜置15-30分鐘，經0-4℃、2000-3500 r/min離心15-25分鐘，取上清液。

2.根據權利要求1所述的黃精實體小分子肽的提取工藝，其特征在于：所述二次酶解步驟中的pH為2.5-3.5，酶解溫度為36-37℃。

3.根據權利要求1所述的黃精實體小分子肽的提取工藝，其特征在于：所述二次酶解步驟中（S）-1-氨基-2-羥甲基二氫吲哚的添加量為胃蛋白酶重量的10-28‰。

4.根據權利要求1所述的黃精實體小分子肽的提取工藝，其特征在于：所述二次酶解步驟中的雙頻率復合超聲與微波輻射交替間隔輔助酶解的方式為超聲45-55秒、微波15-5秒，雙頻率復合超聲的超聲頻率為25-33kHz、55-60kHz，超聲密度為0.50-0.60W/cm2、0.80-0.90W/cm2，微波輻射的功率為150-180W。

5.根據權利要求1所述的黃精實體小分子肽的提取工藝，其特征在于：所述脫脂步驟為：取無變質、無病蟲、干凈健康的黃精實體，清洗干凈后烘干，粉碎后過100-120目篩，將黃精粉置于超臨界CO2萃取釜中，在萃取溫度為45-47℃、萃取壓力為33-35MPa、CO2流量為22-24L/h的條件下萃取2.5-3.0小時，萃取結束后從釜中出粕，經粉碎、篩分、干燥，即獲得黃精脫脂粉。

6.根據權利要求1所述的黃精實體小分子肽的提取工藝，其特征在于：所述初次酶解步驟為：按照料液比1:15-16將黃精脫脂粉溶于蒸餾水中，調節溫度為38-40℃、pH為8.0-8.2，加入2500-3000U/g復合堿性蛋白酶，水解30-45分鐘后水浴滅酶。

7.根據權利要求6所述的黃精實體小分子肽的提取工藝，其特征在于：所述初次酶解步驟中的復合堿性蛋白酶為重量比為2.5-5:1的胰蛋白酶與木瓜蛋白酶的混合物。

8.根據權利要求1所述的黃精實體小分子肽的提取工藝，其特征在于：所述純化步驟為：以超濾裝置讓酶解液通過1KD的超濾膜，收集截留分子量小于1000D的組分，低溫干燥后以-80~-100℃冷凍保藏。