[發明專利]一種用于動物樣本中病毒/細菌核酸提取的方法及試劑

有效

• 申請號: 201711138666.3
• 申請日: 2017-11-16
• 公開（公告）號: CN109385418B
• 公開（公告）日: 2022-07-22
• 發明（設計）人: 尤其敏;朱勤鋒;朱羅羅;袁旦一;李玲;饒煥新;劉瑩;孫剛;胡江文;趙博熹;胡林;何謙
• 申請（專利權）人: 杭州優思達生物技術有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 北京元中知識產權代理有限責任公司 11223
• 代理人: 另婧

本發明公開了一種用于動物樣本中病毒/細菌核酸提取的方法及試劑，取動物樣本，加入裂解液進行室溫裂解，得到裂解反應液；再向裂解反應液中加入乙醇溶液，移至含硅膠吸附膜離心柱，然后采用低速離心的方式進行吸附、清洗和洗脫。本發明提取的病毒核酸純度高，在提取過程中不需要使用蛋白酶K消化樣本，簡化了試劑組分和操作流程；且過程中采用低速離心的方式，可以降低硬件設備的成本，可以采用低速掌上離心機，也便于攜帶，適合現場操作。本發明還優化了裂解液組分，增強了核酸分子與硅膠吸附膜的結合能力，確保了良好的核酸提取效率。

技術領域

本發明屬于核酸提取領域，具體地說，涉及一種用于動物樣本中病毒/細菌核酸提取的方法及試劑。

背景技術

從動物血清中提取核酸是分子生物學研究中經常使用的重要的實驗技術。提取獲得DNA和RNA模板，可用于相關細菌或病毒的分子檢測。

離心柱法是最常用的核酸提取方法之一。該方法利用核酸分子在高鹽低pH環境下與硅膠吸附膜結合，低鹽高pH環境下與硅膠吸附膜分離的特性，可從痰液、血液、尿液等多種類型的樣本中特異性地富集和純化核酸模板。配合高速離心機或自動化的核酸提取儀，離心柱法具有通量大、速度快、提取效率高、模板純度好等優點，能滿足大多數臨床實驗室的檢驗要求。

近年來，利用離心柱法提取血液病毒核酸的試劑盒種類日益豐富。這些產品大多需要蛋白酶K消化樣本，并且依賴高速離心機才能將實現核酸的吸附、清洗和洗脫過程。這些產品對蛋白酶K和高速離心機的依賴，極大地限制了產品的便攜性和時效性，導致核酸提取以及后續的分子檢測過程往往局限在分子實驗室中，而不能在第一時間、在采樣現場當場進行。因此，開發一種不依賴蛋白酶K、高速離心機以及其他昂貴設備的核酸提取方法及試劑，對核酸提取乃至分子檢測技術的推廣普及，具有重要意義。

專利申請201110177638.9公開了一種從生物樣品中提取游離RNA的方法，其具體步驟包括：用化學試劑將生物樣品中的核酸釋放出來；酚氯仿抽提出游離RNA；抽提出的游離RNA在高鹽條件下與硅膠吸附膜結合；洗滌去除雜質；低鹽條件下洗脫，得到高純度的游離RNA。該專利的不足之處在于，使用了具有毒性的酚氯仿試劑，以及轉速10,000g以上的高速離心機。

專利申請201010281633.6公開了一種同時高效提取DNA和RNA的方法和試劑。該專利不使用酚氯仿等有毒試劑，采用含有玻璃纖維膜的離心柱吸附核酸分子，同時結合去除多糖多酚類雜質的助提劑，顯著提高了對植物類核酸的提取效率。盡管如此，該專利在操作過程中依然需要使用轉速8,000g以上的高速離心機。

專利申請201210058721.9，公開了一種快速的大片段基因組脫氧核糖核酸提取方法，通過向抗凝血中加入蛋白酶K和其他試劑，實現了核酸的結合、洗滌和洗脫過程。盡管該專利使用了2,000g的低轉速離心機，但是提取得到的大核酸片段主要是來自白細胞的真核基因組核酸，并不適合純化小片段的病毒基因組核酸。

本發明針對現有技術對高速離心機和蛋白酶K的依賴，提出了一種更為簡潔的核酸提取方法及試劑。該方法操作簡單便捷，不使用蛋白酶K、高速離心機或其他昂貴設備，僅用廉價便攜的低轉速掌上離心機就可以完成血液樣本中病毒核酸的純化，因而具有更加廣泛的應用前景。

發明內容

本發明要解決的技術問題在于克服現有技術的不足，提供一種用于動物樣本中病毒/細菌核酸提取方法及試劑。本發明的提取方法適用于提取動物(包括人)的組織、血清/血漿、分泌液游離核酸，更適用于提取血液病毒核酸，提取的病毒核酸純度高，在提取過程中不需要使用蛋白酶K消化樣本，簡化了試劑組分和操作流程；且采用低速離心的方式，可以降低硬件設備的成本，也便于攜帶，適合現場操作。

為解決上述技術問題，本發明采用技術方案的基本構思是：