[發明專利]一種磷脂酶A1輔助蛋白PlaS的表達及純化方法在審
| 申請號： | 201711137213.9 | 申請日： | 2017-11-16 |
| 公開（公告）號： | CN108004261A | 公開（公告）日： | 2018-05-08 |
| 發明（設計）人： | 薛正蓮;朱昊;王洲;劉艷;陳阿娜;楊蒙;甘玉飛 | 申請（專利權）人： | 安徽工程大學 |
| 主分類號： | C12N15/70 | 分類號： | C12N15/70;C07K14/00;C07K1/14 |
| 代理公司： | 北京東方靈盾知識產權代理有限公司 11506 | 代理人： | 蘇向銀 |
| 地址： | 24100*** | 國省代碼： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 磷脂酶 a1 輔助 蛋白 plas 表達 純化 方法 | ||
1.一種磷脂酶A1輔助蛋白PlaS的表達方法，其特征在于：將磷脂酶A1輔助蛋白plaS基因N端去除信號肽，得到截短輔助蛋白，然后構建大腸桿菌/截短輔助蛋白表達菌株，將表達菌株接種至培養基中進行目的蛋白誘導表達。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述進行目的蛋白誘導表達是將表達菌株接種至含有TB的培養基或乳糖自誘導培養基中進行培養。
3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于：所述含有TB的培養基為TB培養基、TB培養基+0.98wt％甘油+0.75wt％甘氨酸或TB培養基+1-3wt％甘油。
4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于：所述含有TB的培養基為TB培養基+3wt％甘油。
5.根據權利要求1-4任一項所述的方法，其特征在于：在目的蛋白誘導表達后，制備破碎上清蛋白。
6.根據權利要求1-4任一項所述的方法，其特征在于：所述截短輔助蛋白的氨基酸序列為序列表中SEQ ID No.4。
7.一種磷脂酶A1輔助蛋白PlaS的純化方法，其特征在于：應用權利要求1-6任一項表達方法將磷脂酶A1輔助蛋白PlaS進行表達，然后純化。
8.根據權利要求7所述的純化方法，其特征在于：所述純化為用磁珠純化或用AKTA系統過鎳柱純化。
9.根據權利要求8所述的純化方法，其特征在于：所述純化為用AKTA系統過鎳柱純化。
10.根據權利要求9所述的方法，其特征在于：所述用AKTA系統過鎳柱純化時結合緩沖液配方為：20mM磷酸鈉，0.5M NaCl，20mM咪唑，pH 7.4；洗脫緩沖液配方為20mM磷酸鈉，0.5MNaCl，500mM咪唑，pH 7.4。
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