[發明專利]一種分子信標探針檢測人類CYP2C9基因多態性的試劑盒、方法及其應用

在審

• 申請號: 201711136931.4
• 申請日: 2017-11-16
• 公開（公告）號: CN107653317A
• 公開（公告）日: 2018-02-02
• 發明（設計）人: 任緒義;張鋒
• 申請（專利權）人: 黑龍江迪安醫學檢驗所有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 北京科家知識產權代理事務所(普通合伙)11427
• 代理人: 陳娟

1.一種分子信標探針檢測人類CYP2C9基因多態性的引物，其特征在于，包括如下核酸序列：

(1)擴增CYP2C9基因rs1799853多態性位點的引物對，其核苷酸序列如SEQ ID NO.：1和SEQ ID NO.：2所示；擴增CYP2C9基因rs1057910多態性位點的引物對，其核苷酸序列如SEQ ID NO.：3和SEQ ID NO.：4所示；

(2)用于檢測CYP2C9基因rs1799853多態性位點的探針，其核苷酸序列如SEQ ID NO.：5所示，其中探針的5末端標記FAM，3末端標記DABSYL；用于檢測CYP2C9基因rs1057910多態性位點的探針，其核苷酸序列如SEQ ID NO.：6所示，其中探針的5末端標記HEX，3末端標記DABSYL。

上述引物對和熒光探針對在一次檢測中共同使用。

2.一種權利要求1所述的分子信標探針檢測人類CYP2C9基因多態性的引物在檢測人類CYP2C9基因多態性中的應用。

3.一種分子信標探針用于檢測人類CYP2C9基因多態性的試劑盒，其特征在于，該試劑盒包括權利要求1所述的引物和探針，以及2x PCR反應混合液，陽性標準品。

4.一種分子信標探針用于檢測人類CYP2C9基因多態性的方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)提取人外周血基因組DNA；

(2)分別以提取的人外周血基因組DNA和陽性標準品為模板、權利要求1中的引物、探針，PCR反應混合液，進行實時熒光定量PCR反應；

(3)根據檢測到的熒光信號值對rs1799853、rs1057910位點進行溶解曲線基因型判定，其中rs1799853位點選擇FAM通道，rs1057910位點選擇HEX通道。

5.根據權利要求4所述的分子信標探針用于檢測人類CYP2C9基因多態性的方法，其特征在于，所述步驟(2)中，實時熒光定量PCR反應的擴增體系為：總體積20μL，2x PCR反應混合液10uL，SEQ ID NO.：1 0.02uM，SEQ ID NO.：2，0.2uM，SEQ ID NO.：3 0.02uM，SEQ ID NO.：4 0.2uM，SEQ ID NO.：5 0.2uM，SEQ ID NO.：6 0.2uM，模板DNA 10-50ng。

6.根據權利要求4所述的分子信標探針用于檢測人類CYP2C9基因多態性的方法，其特征在于，所述步驟(2)中，實時熒光定量PCR反應中的擴增程序為：95℃，2min；95℃，5s，60℃，45s，收集熒光，50個循環；溶解曲線分析程序為：95℃1min；45℃2分鐘，50-90℃，連續收集熒光。