[發明專利]一種基于吖啶酮的β?葡萄糖醛酸苷酶的熒光探針及其應用

在審

• 申請號: 201711134306.6
• 申請日: 2017-11-16
• 公開（公告）號: CN107915764A
• 公開（公告）日: 2018-04-17
• 發明（設計）人: 馬驍馳;馮磊;田象閣;霍曉奎;王超;寧靜;于振龍;孫成鵬
• 申請（專利權）人: 大連醫科大學
• 主分類號: C07H17/02
• 分類號: C07H17/02;C09K11/06;C12Q1/34;G01N21/64;G01N33/573
• 代理公司: 大連星海專利事務所有限公司21208
• 代理人: 楊翠翠

1.一種基于吖啶酮的β-葡萄糖醛酸苷酶的熒光探針，其特征在于：該探針底物可被β-葡萄糖醛酸苷酶特異性催化，使探針底物中的葡糖醛酸苷鍵加水分解，探針結構式如式（1）所示，

式（1）

該探針底物為1,3-二氯-7- O-β-D-葡萄糖醛酸-9,9-二甲基-2(9H)-吖啶酮。

2.根據權利要求1所述的一種基于吖啶酮的β-葡萄糖醛酸苷酶的熒光探針的應用，其特征在于：采用1,3-二氯-7- O-β-D-葡萄糖醛酸-9,9-二甲基-2(9H)-吖啶酮作為β-葡萄糖醛酸苷酶的特異性底物，進行水解反應，通過定量檢測單位時間內的苷元產物的生成率來定量測定不同生物體系中β-葡萄糖醛酸苷酶的活性。

3.根據權利要求2所述的一種基于吖啶酮的β-葡萄糖醛酸苷酶的熒光探針的應用，其特征在于：所述體外孵育反應條件為：底物濃度介于1/10~10 Km之間；孵育體系pH介于5.5~10.5之間；反應溫度介于20~60℃之間。

4.根據權利要求2所述的一種基于吖啶酮的β-葡萄糖醛酸苷酶的熒光探針的應用，其特征在于：所述生物體系為重組表達β-葡萄糖醛酸苷酶、細胞樣品、人或動物組織、植物、微生物。

5.根據權利要求2所述的一種基于吖啶酮的β-葡萄糖醛酸苷酶的熒光探針的應用，其特征在于：所述底物消除率或產物的生成率低于20%。

6.根據權利要求2所述的一種基于吖啶酮的β-葡萄糖醛酸苷酶的熒光探針的應用，其特征在于：該探針底物的酶解產物具有熒光，酶解產物的檢測條件為激發波長600 nm，最大發射波長為660 nm。

7.根據權利要求2所述的一種基于吖啶酮的β-葡萄糖醛酸苷酶的熒光探針的應用，其特征在于：該探針底物還可用于β-葡萄糖醛酸苷酶抑制劑的快速篩選及抑制能力的定量評價。

8.根據權利要求2所述的一種基于吖啶酮的β-葡萄糖醛酸苷酶的熒光探針的應用，其特征在于：該探針底物也可作為載體及動物整體β-葡萄糖醛酸苷酶的探針底物，評估β-葡萄糖醛酸苷酶的個體及種屬差異。