[發明專利]一種鱘魚精蛋白及鱘魚精蛋白多肽的制備方法

有效

• 申請號: 201711131728.8
• 申請日: 2017-11-15
• 公開（公告）號: CN107857806B
• 公開（公告）日: 2020-12-08
• 發明（設計）人: 白嬋;廖濤;熊光權;耿勝榮;饒丹華;鉏曉艷;張金木;李海藍;李新;汪蘭;吳文錦
• 申請（專利權）人: 湖北省農業科學院農產品加工與核農技術研究所;廣州輻銳高能技術有限公司
• 主分類號: C07K14/46
• 分類號: C07K14/46;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/30;C07K1/18;C07K1/16;C12P21/06
• 代理公司: 武漢開元知識產權代理有限公司 42104
• 代理人: 朱盛華

本發明涉及一種鱘魚精蛋白及鱘魚精蛋白多肽的制備方法，除雜處理后的鱘魚白切碎成漿狀，加NaCl，NaEDTA和PMSF混合液均質勻漿攪拌，離心分離，沉淀物加硫酸提取，低溫離心分離，濾液用NaOH調pH，透析除鹽后用乙醇沉淀，用丙酮和乙醚洗，真空冷凍干燥得鱘魚粗蛋白；經過純化，得鱘魚精蛋白。鱘魚精蛋白用磷酸鹽緩沖液勻漿，加酶，γ射線輻照，酶解得酶解液；酶解液沸水滅酶，冷卻，加三氯乙酸溶液，離心分離，真空冷凍干燥得鱘魚精蛋白多肽。本發明原材料豐富，天然無污染，制備的魚精蛋白及鱘魚精蛋白多肽具有高持水保水性，抑菌效果，可廣泛用于食品、化妝品、藥品領域；特別可作為抗肝素劑用于體外心臟手術中。

技術領域

本發明涉及蛋白及蛋白多肽領域，具體涉及一種鱘魚精蛋白及鱘魚精蛋白多肽的制備方法。

背景技術

魚精蛋白是一種多聚陽離子肽，主要存在于各類動物成熟的精巢組織中，與DNA緊密結合在一起。魚精蛋白具有較強的抑菌特性，在食品中主要用作防腐劑。與一般的化學合成防腐劑相比，魚精蛋白具有許多優點，如安全性高、防腐性能好、熱穩定性好等。而且，作為精氨酸含量豐富的蛋白類物質，魚精蛋白具有很高的營養性和功能性，因此在食品應用研究范圍廣泛。魚精蛋白也可與肝素的葡萄糖胺聚糖結合，是唯一與肝素形成拮抗作用的藥物，可以快速有效地抵抗肝素或人工合成的抗凝血劑的抗凝作用，其在心臟直視手術和心導管介入治療中有較大應用。魚精蛋白多肽是魚精蛋白的酶解產物，具有更小的分子量和異源性，可顯著降低機體過敏風險，有效解決魚精蛋白直接作用與機體時產生的過敏反應、免疫反應甚至休克的突發風險，使魚精蛋白的應用更安全放心。而相比于魚精蛋白，魚精蛋白多肽具有更好的抑菌性，吸水持水性。通過輻照輔助酶解，得到更小分子量的天然活性蛋白肽類，具有高溶解性，高功能性等優點，有廣闊的應用前景。

目前，市場上的魚精蛋白主要提取自鯡、鮭科魚等海水魚，而且得率較低，而我國這類海魚資源缺乏。鱘魚具有高營養價值，蛋白含量高，而鱘魚養殖業產量大，廢棄物精巢組織原料充足。魚類精巢除作為養魚飼料及一部分腌制食品利用外，其它用途很少，價值低。如果從中分離出魚精蛋白，利用蛋白酶抑制劑提高其提取得率，并在適當的領域應用則有望提高其附加價值，同時減少資源浪費和環境污染。

發明內容

本發明的目的是針對等問題，旨在提供一種原材料豐富，天然無污染，抑菌性能強，且具有高持水保水性和抗氧化性；分子量小的鱘魚精蛋白及鱘魚精蛋白多肽的制備方法。

本發明目的的實現方式為，一種鱘魚精蛋白的制備方法，具體步驟如下：

1)取除雜處理后的鱘魚白切碎成漿狀，加0.14mol/L NaCl，0.05mol/L NaEDTA和0.001mol/L PMSF的混合溶液，均質勻漿攪拌1～3min，于0℃攪拌20min，靜置10min，0℃低溫離心，棄去上清液，重復3次，得沉淀物；

2)取步驟1)所得沉淀物按體積比1：5～1：8加入濃度為0.8mol/L～1.2mol/L的硫酸溶液，溫度25～65℃，提取15min～60min，在0℃低溫離心10min,過濾，取濾液，濾渣再重復用硫酸提取2～6次，合并濾液；

3)取步驟2)所得濾液用NaOH調節pH至7.0，透析除鹽后用其體積三倍的95％冷乙醇沉淀，沉淀物分別用丙酮和乙醚各洗2次，真空冷凍干燥24h，得鱘魚粗蛋白；

所述真空冷凍干燥條件為溫度-50℃，壓力10Pa；

4)將步驟3)所得鱘魚粗蛋白經過兩步純化，得鱘魚精蛋白；

所述兩步純化為Sephadex G-50葡聚糖凝膠層析和CM Sepharose Fast Flow離子交換層析純化；

每步分離純化前都加入0.5mol/L NaEDTA和0.1mol/L PMSF的混合溶液；