[發明專利]轉氨酶突變體及其應用

有效

• 申請號: 201711131103.1
• 申請日: 2017-11-15
• 公開（公告）號: CN108048419B
• 公開（公告）日: 2020-10-23
• 發明（設計）人: 洪浩;詹姆斯·蓋吉;盧江平;徐幸福;于文燕;黃鑫;馬玉磊;程逸冰
• 申請（專利權）人: 凱萊英生命科學技術(天津)有限公司
• 主分類號: C12N9/10
• 分類號: C12N9/10;C12N15/54;C12N15/70;C12N15/81;C12N1/21;C12N1/19;C12P17/10
• 代理公司: 北京康信知識產權代理有限責任公司 11240
• 代理人: 韓建偉;謝湘寧

1.一種轉氨酶突變體，其特征在于，所述轉氨酶突變體的氨基酸序列是SEQ ID NO：1所示序列發生突變的氨基酸序列，所述突變的氨基酸位點選自如下任意一種：

2.一種DNA分子，其特征在于，所述DNA分子編碼權利要求1所述的轉氨酶突變體。

3.一種重組質粒，其特征在于，所述重組質粒連接有權利要求2所述的DNA分子。

4.根據權利要求3所述的重組質粒，其特征在于，所述重組質粒為pET-21b(+)、pET-22b(+)、pET-3a(+)、pET-3d(+)、pET-11a(+)、pET-12a(+)、pET-14b、pET-15b(+)、pET-16b(+)、pET-17b(+)、pET-19b(+)、pET-20b(+)、pET-21a(+)、pET-23a(+)、pET-23b(+)、pET-24a(+)、pET-25b(+)、pET-26b(+)、pET-27b(+)、pET-28a(+)、pET-29a(+)、pET-30a(+)、pET-31b(+)、pET-32a(+)、pET-35b(+)、pET-38b(+)、pET-39b(+)、pET-40b(+)、pET-41a(+)、pET-41b(+)、pET-42a(+)、pET-43a(+)、pET-43b(+)、pET-44a(+)、pET-49b(+)、pQE2、pQE9、pQE30、pQE31、pQE32、pQE40、pQE70、pQE80、pRSET-A、pRSET-B、pRSET-C、pGEX-5X-1、pGEX-6p-1、pBV220、pBV221、pBV222、pTrc99A、pTwin1、pEZZ18、pKK232-8、pUC-18或pUC-19。

5.一種宿主細胞，其特征在于，所述宿主細胞含有權利要求4或3所述的重組質粒。

6.根據權利要求5所述的宿主細胞，其特征在于，所述宿主細胞為原核細胞或真核細胞。

7.根據權利要求6所述的宿主細胞，其特征在于，所述真核細胞為酵母細胞。

8.根據權利要求5所述的宿主細胞，其特征在于，所述宿主細胞為感受態細胞。

9.根據權利要求8所述的宿主細胞，其特征在于，所述感受態細胞為大腸桿菌BL21細胞或大腸桿菌W3110。

10.一種生產手性胺的方法，包括采用轉氨酶對酮類化合物及氨基供體進行催化轉氨基反應的步驟，其特征在于，所述轉氨酶為權利要求1所述的轉氨酶突變體。

11.根據權利要求10所述的方法，其特征在于，所述酮類化合物為其中，R₁和R₂各自獨立地為為C1～C8烷基、C5～C10環烷基、C6～C10芳基或C5～C10雜芳基，或者R₁和R₂與羰基上的碳共同形成C5～C10雜環基、C5～C10碳環基或C5～C10雜芳基，所述C5～C10雜環基和C5～C10雜芳基中的雜原子各自獨立地選自氮、氧和硫中的至少一種，所述C6～C10芳基中的芳基、C5～C10雜芳基中的雜芳基、C5～C10碳環基中的碳環基或C5～C10雜環基中的雜環基各自獨立地未被取代或被鹵素、烷氧基或烷基中的至少一個基團所取代。

12.根據權利要求10所述的方法，其特征在于，所述酮類化合物為轉氨基反應產物為

13.根據權利要求10所述的方法，其特征在于，所述氨基供體為異丙胺或異丙胺鹽。