[發明專利]一種基于PCR和磁珠抗體富集技術的快速檢測靶標物的方法

在審

• 申請號: 201711130951.0
• 申請日: 2017-11-15
• 公開（公告）號: CN109283329A
• 公開（公告）日: 2019-01-29
• 發明（設計）人: 孔惠
• 申請（專利權）人: 廣州弗賽生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/574;G01N33/532
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

本發明屬于生物技術領域，公開了一種基于PCR和磁珠抗體富集技術的快速檢測靶標物的方法，包括如下步驟：步驟1：在磁性微球表面標記能夠識別靶標物的抗體或核酸適配體；步驟2：在步驟1得到的磁性微球表面通過抗體或核酸適配體富集靶標物；步驟3：將能夠特異性識別靶標物的DNA標記物與步驟2得到的磁性微球的靶標物結合；步驟4：將磁性微球表面的帶有抗體或核酸適配體?靶標物?DNA標記物的三明治結構分離，并通過PCR或等溫擴增法擴增DNA標記物；步驟5：檢測擴增后的DNA標記物，得到靶標物的濃度結果。該方法檢測特異性高、檢測精度高。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，特別是一種基于PCR和磁珠抗體富集技術的快速檢測靶標物的方法。

背景技術

惡性腫瘤是一種以細胞異常增生為基本特征的人類疾病。伴隨著腫瘤的發生發

展，其大分子物質(包括核酸、蛋白和多糖等)可以由癌細胞釋放進入血液循環，此類游離(Circulating)大分子作為生物標志物(Biomarkers)在腫瘤診斷、預后評估及病情隨訪中均具有廣泛的臨床價值。

但是現有的基于磁珠抗體富集技術的檢測方法普遍存在檢測精度低的問題，無法實現痕量檢測。

發明內容

為了解決上述的缺點和不足，本發明提供了一種檢測精度高的基于PCR和磁珠抗體富集技術的快速檢測靶標物的方法。

其具體方案為：一種基于PCR和磁珠抗體富集技術的快速檢測靶標物的方法，包括如下步驟：

步驟1：在磁性微球表面標記能夠識別靶標物的抗體或核酸適配體；

步驟2：在步驟1得到的磁性微球表面通過抗體或核酸適配體富集靶標物；

步驟3：將能夠特異性識別靶標物的DNA標記物與步驟2得到的磁性微球的靶標物結合；

步驟4：將磁性微球表面的帶有抗體或核酸適配體-靶標物-DNA標記物的三明治結構分離，并通過PCR或等溫擴增法擴增DNA標記物；

步驟5：檢測擴增后的DNA標記物，得到靶標物的濃度結果。

在上述的基于PCR和磁珠抗體富集技術的快速檢測靶標物的方法中，靶標物為細菌、病毒、病原體、細胞或蛋白質。

在上述的基于PCR和磁珠抗體富集技術的快速檢測靶標物的方法中，步驟1的磁性微球為經過羧基化的磁性微球。

在上述的基于PCR和磁珠抗體富集技術的快速檢測靶標物的方法中，所述的DNA標記物為末端帶有氨基或羧基的單鏈核酸。

在上述的基于PCR和磁珠抗體富集技術的快速檢測靶標物的方法中，所述的步驟2中抗體或核酸適配體與靶標物的偶聯、步驟3中靶標物和DNA標記物的偶聯均通過碳化二亞胺進行偶聯。

在上述的基于PCR和磁珠抗體富集技術的快速檢測靶標物的方法中，所述的步驟5中擴增后的DNA標記物通過熒光定量方法或核酸膠體金檢測卡進行檢測。

在上述的基于PCR和磁珠抗體富集技術的快速檢測靶標物的方法中，所述的磁性微球的粒徑為25nm。

本發明的有益效果在于：

本發明通過PCR和磁珠抗體富集技術進行結合，可以對靶標物實現痕量檢測，檢測精度高。

附圖說明

圖1為本發明實施例1的靈敏度實驗結果圖；

圖2為本發明實施例1的特異性實驗結果圖。

具體實施方式

下面結合具體實施方式，對本發明的技術方案作進一步的詳細說明，但不構成對本發明的任何限制。