[發(fā)明專利]一種免疫凝集和膠體金層析試紙條相結(jié)合的用于檢測HIT抗體的系統(tǒng)

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711128922.0
• 申請日: 2017-11-15
• 公開（公告）號: CN107727851A
• 公開（公告）日: 2018-02-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 高磊;占順利;竇鑫;楊婭楠;劉國強
• 申請（專利權(quán)）人: 北京舜雷科技有限公司;北京寬厚醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/543
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司11245
• 代理人: 關(guān)暢,何葉喧

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于醫(yī)學(xué)檢測領(lǐng)域，涉及一種免疫凝集和膠體金層析試紙條相結(jié)合的用于檢測HIT抗體的系統(tǒng)。

背景技術(shù)

肝素是臨床中最常使用的抗凝藥物。包括普通肝素、低分子量肝素、類肝素以及其它硫酸氨基葡聚糖等肝素制劑。肝素在使用過程中會產(chǎn)生肝素/血小板因子4復(fù)合物抗體(AHPF4抗體，又稱HIT抗體)，HIT抗體可引起肝素誘導(dǎo)的血小板減少癥(heparin-induced thrombocytopenia，HIT)。普通肝素治療引起的HIT的發(fā)生率為1％-5％，低分子量肝素的引發(fā)率低于普通肝素。約50％的HIT患者會合并發(fā)生嚴(yán)重的并發(fā)癥-血栓形成綜合癥(HIT with thrombosis syndrome，HITTS)，包括深靜脈血栓形成、肺栓塞、動脈血栓形成、外周動脈栓塞、腦卒中、肢體壞疽等。

針對HIT，臨床上尚無可靠確診的方法，目前主要根據(jù)臨床表現(xiàn)并結(jié)合HIT抗體檢測而診斷。目前HIT抗體相關(guān)的檢測方法包括功能性測定(檢測抗體激活血小板能力)和免疫性測定(檢測抗體的滴度。功能性血小板試驗包括血小板凝集試驗(PAgT)、肝素誘導(dǎo)血小板聚集試驗(HIPA)、¹⁴C血清素釋放試驗(SRA)等。SRA是目前最敏感和特異的檢測HIT抗體的實驗室方法，但它需要放射性同位素示蹤劑，且需要新鮮正常的供體血小板，致使試驗操作復(fù)雜、耗費時間長。免疫學(xué)檢測主要包括酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)、膜吸附酶聯(lián)免疫濾過測定法(ELIFA)、粒膠凝集免疫測定法(PaGIA)和流式細胞儀測定等。上述各個現(xiàn)存的HIT抗體檢測技術(shù)和方法，均存在諸多缺陷，目前尚缺乏一種實用、簡便、快捷的檢測方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種免疫凝集和膠體金層析試紙條相結(jié)合的用于檢測HIT抗體的系統(tǒng)。

本發(fā)明提供了一種用于檢測HIT抗體的系統(tǒng)，包括血小板因子4/肝素復(fù)合物與藍色乳膠微球的偶聯(lián)物、試紙條和反應(yīng)檢測裝置；

藍色乳膠微球的粒徑為0.1-1μm；

試紙條包括底板1、樣品墊2、膠體金墊3、檢測墊4、吸水墊5和過濾膜6；沿樣品流動方向，樣品墊、膠體金墊、檢測墊和吸水墊依次固定于底板上；膠體金墊上附著有膠體金標(biāo)記的抗人IgG抗體；檢測墊上表面具有C線7，C線與樣品流動方向垂直，C線上附著有人IgG蛋白；樣品墊上表面固定過濾膜；過濾膜為微孔膜，孔徑為0.1-1.5μm；

反應(yīng)檢測裝置包括反應(yīng)部件和檢測部件；檢測部件為具有試紙條固定區(qū)8的基板；試紙條固定區(qū)與試紙條形狀對應(yīng)，設(shè)置有對應(yīng)試紙條的過濾膜的通孔甲9、用于觀察試紙條的檢測墊的通孔乙10和用于觀察試紙條的C線的通孔丙11；通孔乙位于通孔甲和通孔丙之間；通孔甲上方具有凸出基板平面的環(huán)形側(cè)壁；反應(yīng)部件上具有反應(yīng)池12和導(dǎo)流槽13；導(dǎo)流槽的一端與反應(yīng)池連通，另一端開口于檢測部件的環(huán)形側(cè)壁從而與通孔甲連通；導(dǎo)流槽為傾斜狀，與反應(yīng)池連通的一端高于與通孔甲連通的一端；導(dǎo)流槽與反應(yīng)池連通的部位設(shè)有處于閉合狀態(tài)的開關(guān)14。

過濾膜為圓形。

通孔甲為圓形。

通孔甲的孔徑小于過濾膜的直徑。

過濾膜直徑為1cm。

通孔甲直徑為0.9cm。

通孔乙為圓形。

通孔乙直徑為0.6cm。

藍色乳膠微球的粒徑為0.3μm。

微孔膜的孔徑為0.45μm。

C線到吸水墊與檢測墊的邊緣線的距離為0.5-1.5cm(具體可為1cm)。

通孔乙對應(yīng)的試紙條中的區(qū)域到吸水墊與檢測墊的邊緣線的距離為3-4cm。

每厘米C線上附著有0.5μg人IgG蛋白。

每平方厘米膠體金墊上附著有12μg膠體金標(biāo)記的兔抗人IgG抗體。

沿樣品流動方向作為試紙條的長度方向，與長度方向垂直的方向作為試紙條的寬度方向；試紙條的寬度為1cm；試紙條的總長度為12cm，其中樣品墊的長度為1.5cm，膠體金墊的長度為1.5cm，檢測墊的長度為8cm，吸水墊的長度為1cm。

樣品墊的材質(zhì)具體可為玻璃纖維膜。

膠體金墊的材質(zhì)具體可為玻璃纖維膜。

檢測墊的材質(zhì)具體可為硝酸纖維素膜。

吸水墊的材質(zhì)具體可為吸水紙。

過濾膜的材質(zhì)為硝酸纖維素膜(nitrocellulose filter membrane，簡稱NC膜)或者聚偏二氟乙烯膜(polyvinylidene fluoride，簡稱PVDF膜)。

底板僅起支撐作用，常規(guī)材質(zhì)均可，例如軟質(zhì)塑料。