[發明專利]一種用于Wnt反應元件的體外迷你報告基因及其應用

在審

• 申請號: 201711127625.4
• 申請日: 2018-02-09
• 公開（公告）號: CN107893071A
• 公開（公告）日: 2018-04-10
• 發明（設計）人: 謝浩;方明;汪銳;畢彩麗;吳紅燕;程乾
• 申請（專利權）人: 東南大學
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12N15/63;C12N15/65;C12Q1/6886;A61K48/00;A61P35/00
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司32200
• 代理人: 黃欣

技術領域

本發明屬于分子生物學技術領域，具體涉及一種用于Wnt反應元件的體外迷你報告基因及其應用。

背景技術

癌癥占人類死亡病因的近1/4，在過去的幾十年里腫瘤復發和轉移仍是改善整體存活率的主要障礙，這可能主要歸因于人們對于癌癥生物學仍然缺乏全面的了解。如何及時檢測癌癥的發生發展成為醫學領域的一個焦點問題。而Wnt信號通路與多種腫瘤的發生的發展相關。Wnt 信號通路的抑制受到廣泛關注的重要原因之一是很多癌癥與 Wnt 信號的異常激活關系密切。Wnt 信號通路在信號通路的各個層面均受到多種負調控因子的作用，因此 Wnt 信號通路的強弱是諸多蛋白因子綜合作用的結果（Nusse & Clevers, 2017）。哺乳動物的研究發現，在細胞外，除了 Wnt 信號分子本身的分泌和表達之外，還受到多種分泌蛋白的抑制。令人感興趣的是，負反饋抑制，這一調控細胞穩態的基本機制之一，也適用于信號轉導通路包括 Wnt 通路(Barolo & Posakony, 2002)。例如，表達 Dkk-1，部分 SFRP 和 Axin 的基因均直接受 Wnt 信號通路的調控，這些 Wnt 直接靶基因的調控序列均可以和 Wnt 核效應蛋白 TCF/LEF1 相結合，因此，它們都隸屬于 Wnt 的負反饋調控因子。

目前已經在Wnt靶基因尤其是負反饋調控因子如Nkd、Notum的位置找到并驗證了諸多Wnt 反應元件的存在，這些Wnt反應元件可以結合TCF/LEF1轉錄因子，開啟Wnt靶基因的表達（Chang, Chang, Barolo, & Cadigan, 2008; Fang et al., 2006），而由12個串聯的TCF結合位點構成的Super Topflash（Fang et al., 2006）更是可以高效地反映Wnt信號的強弱。Wnt靶基因表達的高低，直接決定了表達Wnt的腫瘤如前列腺癌、肺癌及乳腺癌等的激素去勢治療后抵抗或復發轉移。

參考文獻：

Barolo, S., & Posakony, J. W. (2002). Three habits of highly effective signaling pathways: principles of transcriptional control by developmental cell signaling. Genes Dev, 16(10), 1167-1181. doi: 10.1101/gad.976502

Chang, J. L., Chang, M. V., Barolo, S., & Cadigan, K. M. (2008). Regulation of the feedback antagonist naked cuticle by Wingless signaling. Dev Biol, 321(2), 446-454. doi: 10.1016/j.ydbio.2008.05.551

Fang, M., Li, J., Blauwkamp, T., Bhambhani, C., Campbell, N., & Cadigan, K. M. (2006). C-terminal-binding protein directly activates and represses Wnt transcriptional targets in Drosophila. EMBO J, 25(12), 2735-2745. doi: 10.1038/sj.emboj.7601153

Nusse, R., & Clevers, H. (2017). Wnt/beta-Catenin Signaling, Disease, and Emerging Therapeutic Modalities. Cell, 169(6), 985-999. doi: 10.1016/j.cell.2017.05.016

發明內容

解決的技術問題：本發明的目的是提供一種用于Wnt反應元件的體外迷你報告基因及其應用，通過該迷你報告基因，可以能夠直觀和高效、準確的驗證和阻斷該特異性目標基因位點的表達及作用。

技術方案：

一種用于Wnt反應元件的體外迷你報告基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示。

一種用于Wnt反應元件的體外迷你報告基因質粒，該質粒整合了權利要求1所述的SEQ ID NO.7所示的核苷酸序列。