[發(fā)明專利]一種用于Wnt反應(yīng)元件的體外迷你報(bào)告基因及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711127625.4
• 申請(qǐng)日: 2018-02-09
• 公開（公告）號(hào): CN107893071A
• 公開（公告）日: 2018-04-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 謝浩;方明;汪銳;畢彩麗;吳紅燕;程乾
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 東南大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/11
• 分類號(hào): C12N15/11;C12N15/63;C12N15/65;C12Q1/6886;A61K48/00;A61P35/00
• 代理公司: 南京經(jīng)緯專利商標(biāo)代理有限公司32200
• 代理人: 黃欣

1.一種用于Wnt反應(yīng)元件的體外迷你報(bào)告基因，其特征在于：其核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示。

2.一種用于Wnt反應(yīng)元件的體外迷你報(bào)告基因質(zhì)粒，其特征在于：該質(zhì)粒整合了權(quán)利要求1所述的SEQ ID NO.7所示的核苷酸序列。

3.權(quán)利要求2所述的用于Wnt反應(yīng)元件的體外迷你報(bào)告基因質(zhì)粒的構(gòu)建方法，其特征在于：包括以下步驟：

步驟1，以SEQ ID NO.1及SEQ ID NO.3所示的序列作為引物，以人類基因組DNA為模板擴(kuò)增nkd的內(nèi)含子序列；

步驟2，以SEQ ID NO.2及SEQ ID NO.4所示的序列作為引物，退火形成如SEQ ID NO.8所示的串聯(lián)TCF結(jié)合位點(diǎn)序列；

步驟3，以SEQ ID NO.5及SEQ ID NO.6所示的序列作為引物，擴(kuò)增EGFP、RFP、CFP或YFP；

步驟4，將步驟1、步驟2和步驟3的擴(kuò)增產(chǎn)物順序連接克隆進(jìn)pGL3載體，插入位點(diǎn)為Hind III和Xba I酶切位點(diǎn)，即得。

4.權(quán)利要求1所述的Wnt反應(yīng)元件迷你報(bào)告基因在制備治療癌癥藥物中的應(yīng)用。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的癌癥是實(shí)體瘤，或癌癥細(xì)胞來(lái)源于實(shí)體瘤。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的癌癥為前列腺癌、肺癌、乳腺癌、睪丸癌、子宮頸癌或結(jié)腸癌。

7.權(quán)利要求1所述的Wnt反應(yīng)元件迷你報(bào)告基因在制備診斷Wnt相關(guān)腫瘤的抵抗及復(fù)發(fā)的試劑中的應(yīng)用。

8.一種用于檢測(cè)和定量細(xì)胞中的Wnt反應(yīng)元件表達(dá)的試劑盒，其特征在于，包含：

a)權(quán)利要求1所述的Wnt反應(yīng)元件迷你報(bào)告基因；

b)適合重配a)的鹽水或緩沖溶液。