[發明專利]AAVS1位點定點整合外源基因的人iPS細胞的構建方法有效
| 申請號： | 201711123952.2 | 申請日： | 2017-11-14 |
| 公開（公告）號： | CN107937441B | 公開（公告）日： | 2021-02-26 |
| 發明（設計）人： | 劉曉玫;張春;姜巖;袁運;魏靜;王東鑫;王飛飛;魏崢;曹金晶 | 申請（專利權）人： | 中國科學院蘇州生物醫學工程技術研究所 |
| 主分類號： | C12N15/864 | 分類號： | C12N15/864;C12N5/10 |
| 代理公司： | 北京遠大卓悅知識產權代理有限公司 11369 | 代理人： | 韓飛 |
| 地址： | 215163 江蘇*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | aavs1 定點 整合 基因 ips 細胞 構建 方法 | ||
【權利要求書】：
1.AAVS1位點定點整合外源基因的人iPS細胞的構建方法，其特征在于，包括：構建含有外源基因的第一重組質粒，所述第一重組質粒與pDG質粒共轉染AAV-293細胞，從而包裝得到第一rAAV；所述第一重組質粒中還含有AAV ITR；
構建含有AAV Rep78的第二重組質粒，所述第二重組質粒與pDG質粒共轉染AAV-293細胞，從而包裝得到第二rAAV；所述第二重組質粒中還含有AAV ITR；
所述第一rAAV和第二rAAV以15:1的比例共同轉導人成體細胞，在轉導人成體細胞時，所述第一rAAV的MOI值為105；
將所述外源基因定點整合于人成體細胞19號染色體的AAVS1位點，應用流式細胞技術檢測并篩選得到定點整合外源基因的人成體細胞；將Oct4、Sox2、Klf4和c-Myc引入到定點整合有外源基因的人成體細胞中，得到ips細胞。
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