[發明專利]經蛋白酶M酶解的山杏仁蛋白源ɑ-葡萄糖苷酶抑制肽及其制備方法有效
| 申請號： | 201711121194.0 | 申請日： | 2017-11-14 |
| 公開（公告）號： | CN107698659B | 公開（公告）日： | 2021-03-02 |
| 發明（設計）人： | 顧欣;王建中;李迪;曲留柱;陳林 | 申請（專利權）人： | 重慶三峽學院 |
| 主分類號： | C07K5/078 | 分類號： | C07K5/078;C07K1/30;C07K1/20;C07K1/16;C12P21/06 |
| 代理公司： | 重慶強大凱創專利代理事務所(普通合伙) 50217 | 代理人： | 成艷;黃書凱 |
| 地址： | 400020 *** | 國省代碼： | 重慶;50 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 蛋白酶 杏仁 蛋白 葡萄 糖苷酶 抑制 及其 制備 方法 | ||
1.經蛋白酶M酶解的山杏仁蛋白源ɑ-葡萄糖苷酶抑制肽的制備方法，其特征在于：包括以下步驟，
一、利用等電點沉淀法提取山杏仁蛋白；
二、利用蛋白酶M酶解山杏仁蛋白制備山杏仁蛋白酶解物多肽；
三、將經蛋白酶M酶解制備的山杏仁蛋白酶解物多肽分離純化，得山杏仁蛋白源ɑ-葡萄糖苷酶抑制肽，所述山杏仁蛋白源ɑ-葡萄糖苷酶抑制肽的序列為色氨酸-絲氨酸；
所述步驟二中，利用蛋白酶M酶解制備山杏仁蛋白酶解物多肽的方法為：蛋白酶M對步驟一中得到的山杏仁蛋白進行酶解，酶解后滅酶10min，冷卻后離心取上清液，得酶解液，即為山杏仁蛋白酶解物多肽；
蛋白酶M的酶解條件為pH為7.0，溫度50℃，底物濃度為50mg/mL，酶添加量與底物的質量比為0.02mg/mg，酶解時間6h；
山杏仁蛋白源ɑ-葡萄糖苷酶抑制肽的氨基酸序列為色氨酸-絲氨酸，結構式為：
2.根據權利要求1所述的經蛋白酶M酶解的山杏仁蛋白源ɑ-葡萄糖苷酶抑制肽的制備方法，其特征在于：所述的步驟三中，對經蛋白酶M酶解制備的山杏仁蛋白酶解物多肽分離純化的方法為：
a、超濾酶解液后，真空冷凍干燥，得到山杏仁多肽凍干粉；
b、凝膠層析分離；
c、反相高效液相色譜分離；
d、分子篩分離；
e、反相高效液相色譜純化，得到ɑ-葡萄糖苷酶抑制肽。
3.根據權利要求2所述的經蛋白酶M酶解的山杏仁蛋白源ɑ-葡萄糖苷酶抑制肽的制備方法，其特征在于：所述步驟a中，超濾酶解液后，收集分子量＜5kDa的酶解液，真空冷凍干燥。
4.根據權利要求3所述的經蛋白酶M酶解的山杏仁蛋白源ɑ-葡萄糖苷酶抑制肽的制備方法，其特征在于：所述步驟一中，等電點沉淀法中，
1)取脫脂山杏仁粕粉，按照液料比加入去離子水，配制成山杏仁蛋白溶液；
2)超聲使樣品蛋白溶出，調節反應溶液的pH、溫度，攪拌提取；
3)提取后，取浸提液離心，收集上清液；
4)用1mol/L HCl調節上清液pH至山杏仁蛋白的等電點，離心，棄去上清液，收集沉淀；
5)用去離子水使沉淀復溶，調節溶液pH值，冷凍干燥，得山杏仁蛋白。
5.根據權利要求4所述的經蛋白酶M酶解的山杏仁蛋白源ɑ-葡萄糖苷酶抑制肽的制備方法，其特征在于：所述步驟一的2)中，提取溫度為37℃，提取時間為60min，pH為9.0，所述的步驟一的1)中，液料比為14mL/g。
6.根據權利要求5所述的經蛋白酶M酶解的山杏仁蛋白源ɑ-葡萄糖苷酶抑制肽的制備方法，其特征在于：所述的步驟一的4)中，山杏仁蛋白的等電點為pI 4.1。
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