[發明專利]檢測O?乙酰葡萄糖胺轉移酶的納米傳感器及其檢測方法

在審

• 申請號: 201711120925.X
• 申請日: 2017-11-14
• 公開（公告）號: CN107723339A
• 公開（公告）日: 2018-02-23
• 發明（設計）人: 張春陽;胡娟;李玥穎
• 申請（專利權）人: 山東師范大學
• 主分類號: C12Q1/48
• 分類號: C12Q1/48;G01N21/64
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司37221
• 代理人: 王志坤

1.一種檢測O-乙酰葡萄糖胺轉移酶的納米傳感器，其特征在于，所述納米傳感器包括：花菁5/生物素修飾的肽鏈；非放射性尿苷-乙酰葡萄糖胺，蛋白酶K和被鏈霉親和素包被的量子點。

2.根據權利要求1所述檢測O-乙酰葡萄糖胺轉移酶的納米傳感器，其特征在于，所述花菁5/生物素修飾的肽鏈為：

Biotin-Ser-Thr-Pro-Val-Ser-Arg-Ala-Asn-Met-Lys-Cy5。

3.根據權利要求書1或2所述納米傳感器的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1.由糖供體尿苷-乙酰葡萄糖胺的糖基將花菁5/生物素修飾的肽糖基化；

S2.蛋白酶K區分糖基化和非糖基化肽；

S3.糖基化的肽通過鏈霉親和素和生物素的相互作用自組裝到量子點表面形成量子點-肽-花菁5的納米結構和后續的熒光共振能量轉移信號的測量。

4.根據權利要求3所述的檢測方法，其特征在于，所述步驟S1的操作步驟為：含有2-3微摩爾每升的花菁5/生物素修飾的肽，90-100微摩爾每升的尿苷-乙酰葡萄糖胺，0.01-0.1單位的堿性磷酸酶，待測的OGT和10×反應緩沖液，組成總體積為20微升的反應溶液中在37℃下溫育1個小時；所述反應緩沖液由500毫摩爾每升三羥甲基氨基甲烷，200毫摩爾每升的氯化鈣，0.5％吐溫-20和0.5％NP-40組成，pH值為7.8。

5.根據權利要求4所述的檢測方法，其特征在于，所述步驟S1的具體操作步驟為：含有2.4微摩爾每升的花菁5/生物素修飾的肽，96微摩爾每升的尿苷-乙酰葡萄糖胺，0.05單位的堿性磷酸酶，待測的OGT和10×反應緩沖液，組成總體積為20微升的反應溶液中在37℃下溫育1個小時。

6.根據權利要求3所述的檢測方法，其特征在于，所述步驟S2的操作步驟為：將1-2納克蛋白酶K加入到糖基化反應產物中，反應總體積為30微升的系統，在50-60℃下反應1-3小時。

7.根據權利要求6所述的檢測方法，其特征在于，所述步驟S2的具體操作步驟為：將1.5納克蛋白酶K加入到糖基化反應產物中，反應總體積為30微升的系統，在55℃下反應2小時。

8.根據權利要求3所述的檢測方法，其特征在于，所述步驟S3的操作步驟為：取20-40微升步驟S2的反應產物用5-15納摩爾每升量子點在100微升的培養緩沖液中在室溫下反應10-30分鐘，形成量子點-肽-花菁5的納米結構；其中，所述培養緩沖液由：3毫摩爾每升的氯化鎂，100毫摩爾每升的pH 8.0的三羥甲基氨基甲烷-鹽酸和10毫摩爾每升的硫酸銨組成，pH值為8.0。

9.根據權利要求8所述的檢測方法，其特征在于，所述步驟S3的具體操作步驟為：取30微升步驟S2的反應產物用10納摩爾每升量子點在100微升的培養緩沖液中在室溫下反應20分鐘，形成量子點-肽-花菁5的納米結構。

10.根據權利要求1或2所述納米傳感器在酶動力學參數的測量、OGT抑制劑的篩選以及細胞OGT活性的定量檢測方面的應用。