[發明專利]經蛋白酶Prote AX酶解的山杏仁蛋白源α-葡萄糖苷酶抑制肽及其制備方法

有效

• 申請號: 201711120858.1
• 申請日: 2017-11-14
• 公開（公告）號: CN107746426B
• 公開（公告）日: 2020-12-01
• 發明（設計）人: 顧欣;王建中;李迪;陳林;曲留柱
• 申請（專利權）人: 重慶三峽學院
• 主分類號: C07K5/078
• 分類號: C07K5/078;C12P21/06;C07K1/36;C07K1/30;C07K1/20;C07K1/16
• 代理公司: 重慶強大凱創專利代理事務所(普通合伙) 50217
• 代理人: 成艷;黃書凱

1.經蛋白酶Prote AX酶解的山杏仁蛋白源ɑ-葡萄糖苷酶抑制肽的制備方法，其特征在于：包括以下步驟，

一、利用等電點沉淀法提取山杏仁蛋白；

二、利用蛋白酶Prote AX酶解山杏仁蛋白,制備山杏仁蛋白酶解物多肽；

三、將經蛋白酶Prote AX酶解制備的山杏仁蛋白酶解物多肽分離純化，得山杏仁蛋白源ɑ-葡萄糖苷酶抑制肽，所述抑制肽的序列為色氨酸-組氨酸；

所述步驟二中，利用蛋白酶Prote AX酶解制備山杏仁蛋白酶解物多肽的方法為：蛋白酶Prote AX對步驟一中得到的山杏仁蛋白進行酶解，酶解后滅酶10min，冷卻后離心取上清液，得酶解液，即為山杏仁蛋白酶解物多肽；

蛋白酶Prote AX的酶解條件為pH為6.0，溫度50℃，底物濃度為50mg/mL，酶添加量與底物的質量比為0.02mg/mg，酶解時間6h；

山杏仁蛋白源ɑ-葡萄糖苷酶抑制肽的氨基酸序列為色氨酸-組氨酸，結構式為：

2.根據權利要求1所述的經蛋白酶Prote AX酶解的山杏仁蛋白源ɑ-葡萄糖苷酶抑制肽的制備方法，其特征在于：所述的步驟三中，對經蛋白酶Prote AX酶解制備的山杏仁蛋白酶解物多肽分離純化的方法為：

a、超濾酶解液后，真空冷凍干燥，得到山杏仁多肽凍干粉；

b、凝膠層析分離；

c、反相高效液相色譜分離；

d、分子篩分離；

e、反相高效液相色譜純化，得到ɑ-葡萄糖苷酶抑制肽。

3.根據權利要求2所述的經蛋白酶Prote AX酶解的山杏仁蛋白源ɑ-葡萄糖苷酶抑制肽的制備方法，其特征在于：所述步驟a中，超濾酶解液后，收集分子量＜5kDa的酶解液，真空冷凍干燥。

4.根據權利要求3所述的經蛋白酶Prote AX酶解的山杏仁蛋白源ɑ-葡萄糖苷酶抑制肽的制備方法，其特征在于：所述步驟一中，等電點沉淀法中，

1)取脫脂山杏仁粕粉，按照液料比加入去離子水，配制成山杏仁蛋白溶液；

2)超聲使樣品蛋白溶出，調節反應溶液的pH、溫度，攪拌提取；

3)提取后，取浸提液離心，收集上清液；

4)用1mol/L HCl調節上清液pH至山杏仁蛋白的等電點，離心，棄去上清液，收集沉淀；

5)用去離子水使沉淀復溶，調節溶液pH值，冷凍干燥，得山杏仁蛋白。

5.根據權利要求4所述的經蛋白酶Prote AX酶解的山杏仁蛋白源ɑ-葡萄糖苷酶抑制肽的制備方法，其特征在于：所述步驟一的2)中，提取溫度為37℃，提取時間為60min，pH為9.0，所述的步驟一的1)中，液料比為14mL/g。

6.根據權利要求5所述的經蛋白酶Prote AX酶解的山杏仁蛋白源ɑ-葡萄糖苷酶抑制肽的制備方法，其特征在于：所述的步驟一的4)中，山杏仁蛋白的等電點為pI 4.1。