[發(fā)明專利]一種制備利拉魯肽的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711120697.6
• 申請日: 2017-11-14
• 公開（公告）號: CN107880111B
• 公開（公告）日: 2021-02-05
• 發(fā)明（設計）人: 陳曉航;劉志國;紀東亮;秦德志
• 申請（專利權）人: 浙江湃肽生物有限公司
• 主分類號: C07K14/605
• 分類號: C07K14/605;C07K1/16;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 杭州華知專利事務所(普通合伙) 33235
• 代理人: 張德寶

本發(fā)明公開了一種固相法制備利拉魯肽的方法，包括通過Glu側鏈羧基進行固相支載，合成氨基酸樹脂F(xiàn)moc?Glu(Resin)?OAll；以Fmoc?Glu(Resin)?OAll為起始樹脂合成肽樹脂中間；偶聯(lián)片段，制得利拉魯肽肽樹脂；利拉魯肽肽樹脂經(jīng)酸性條件裂解、HPLC純化、冷凍干燥后制得高純度利拉魯肽。本發(fā)明所采用的支載方法由于Glu側鏈相對較長，從而起到了肽鏈和樹脂間連接橋(Linker)的作用，增加了肽鏈與樹脂之間的柔性。使肽鏈更容易變形而降低反應位阻，從而提高合成反應效率。

技術領域

本發(fā)明涉及多肽合成領域，特別涉及一種利拉魯肽的制備方法。。

背景技術

糖尿病是一種全球性疾病，據(jù)報道2014年全球共有糖尿病患者 4.22億人，約占全球人口的8.5％，其中II型糖尿病占約90％。利拉魯肽是一種用于治療II型糖尿病的人胰高血糖素樣-1(GLP-1)的修飾物，具有GLP-1受體激動作用，在分子結構、生物活性、作用靶點及免疫原性等方面與GLP-1相似。利拉魯肽屬于新一代腸促胰島素降血糖藥物，作用時間長，并可能對多種心血管危險因素具有正面作用。利拉魯肽的上市為患者增加了一種更人性化的降糖治療選擇。利拉魯肽英名為Liraglutide，其結構式為：

利拉魯肽分子結構與GLP-1(7-37)具有97％同源性。不同處在于以 Arg替代Lys³⁴；Lys²⁶側鏈氨基經(jīng)過N^α-棕櫚酰經(jīng)過γ-谷氨酰化。長鏈脂肪酸側鏈可以使利拉魯肽在血液中與白蛋白可逆性地結合，從而降低了被DPP-IV水解的速率和腎清除率，從而延長生物半衰期到 11～15h，每天只需皮下注射一次，提高了患者的順應性。

利拉魯肽由諾和諾德公司通過基因重組技術和化學修飾生產并上市，專利CN1271086A、CN1951965A、CN100569798A。

專利CN102286092A、CN103145828A、CN103980358A、 CN103304660A等記載了通過固相氨基酸偶聯(lián)法合成利拉魯肽,此類方法操作簡單，但面臨肽樹脂增長過程中，困難序列形成導致合成效率低下的缺點，所得粗品純度低、純化操作步驟多且雜質不易控制等問題，且合成周期相對較長。

專利CN102875665A、CN104045705A、CN103304659A、 CN103864918A、CN104004083A、WO2016/067271A1等公開了通過片段法結合固相法合成利拉魯肽，該固相法合成利拉魯肽都是通過主鏈碳端氨基酸Gly支載于固相樹脂。此類方法合成的利拉魯肽粗品相對容易純化，且合成周期有所縮短。但由于其固相樹脂支載位置，處于肽鏈碳端位置，使得整條肽鏈更易扭曲、空間位阻增大而造成后續(xù)偶聯(lián)效率下降。

專利CN103864918A、WO2014/199397A2等則通過固相法合成片段，然后在液相中，進行片段組合連接合成利拉魯肽。此類方法合成利拉魯肽粗品容易純化，生產周期較短，但前期片段合成和純化工作量巨大。

發(fā)明內容：

本發(fā)明的目的是結合現(xiàn)有化學合成技術各項優(yōu)點，提供一種首次將固相樹脂支載于利拉魯肽21位Glu側鏈羧基上進行利拉魯肽肽樹脂的固相法合成，使固相樹脂載體處于肽鏈接近中部位置，示意圖如圖3所示。

如背景技術所述，現(xiàn)有固相合成利拉魯肽的技術，都是將樹脂支載于肽鏈碳端進行接肽反應合成利拉魯肽肽樹脂，示意圖如圖4所示。

本發(fā)明所采用的支載方法由于Glu側鏈相對較長，從而起到了肽鏈和樹脂間連接橋(Linker)的作用，增加了肽鏈與樹脂之間的柔性。使肽鏈更容易變形而降低反應位阻，從而提高合成反應效率。

為實現(xiàn)發(fā)明目的，本發(fā)明采取如下的技術方案：