[發(fā)明專利]一種制備利拉魯肽的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711120697.6
• 申請日: 2017-11-14
• 公開（公告）號: CN107880111B
• 公開（公告）日: 2021-02-05
• 發(fā)明（設計）人: 陳曉航;劉志國;紀東亮;秦德志
• 申請（專利權）人: 浙江湃肽生物有限公司
• 主分類號: C07K14/605
• 分類號: C07K14/605;C07K1/16;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 杭州華知專利事務所(普通合伙) 33235
• 代理人: 張德寶

1.一種利拉魯肽的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟1、通過Fmoc-Glu-OAll與樹脂Resin反應合成Fmoc-Glu(Resin)-OAll氨基酸樹脂I；其中，所述反應是在活化劑存在下進行偶聯(lián)反應，所述的樹脂Resin為固相載體樹脂，固相載體樹脂為羥基類型樹脂，羥基類型樹脂為Wang樹脂或?qū)αu甲基苯氧甲基聚苯乙烯HMP樹脂；

步驟2、通過Trityl-Cl類型樹脂合成Fmoc-Phe-Ile-Ala-Trp(Boc)-Leu-Val-Arg(pbf)-Gly-Arg(pbf)-Gly-OH片段II，經(jīng)過碳端叔丁酯化、去Fmoc后得到H-Phe-Ile-Ala-Trp(Boc)-Leu-Val-Arg(pbf)-Gly-Arg(pbf)-Gly-OtBu片段IV；

步驟3、Fmoc-Glu(Resin)-OAll氨基酸樹脂I在去保護液作用下脫去保護基Fmoc后，在活化劑系統(tǒng)存在下與Fmoc-Lys(P_g1)-OH偶聯(lián)得Fmoc-Lys(P_g1)-Glu(Resin)-OAll肽樹脂Ⅱ；其中，P_g1為Dde或iVDde；

步驟4、Fmoc-Lys(P_g1)-Glu(Resin)-OAll肽樹脂Ⅱ脫除Fomc后，在活化劑系統(tǒng)存在下與Fmoc-Ala-OH偶聯(lián)得Fmoc-Ala-Lys(P_g1)-Glu(Resin)-OAll，繼續(xù)重復脫Fmoc和偶聯(lián)操作，依次偶聯(lián)Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Glu(tBu)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Asp(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Glu(tBu)-OH、Fmoc-Ala-OH、Boc-His(P_g2)OH得Boc-His(P_g2)-Ala-Glu(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(tBu)-Val-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Leu-Glu(tBu)-Gly-Gln(Trt)-Ala-Ala-Lys(P_g1)-Glu(Resin)-OAll肽樹脂Ⅲ；其中，P_g2為Trt或Boc；

步驟5、肽樹脂Ⅲ在堿性條件下脫除保護基P_g1后，在活化劑系統(tǒng)存在下與Fmoc-Glu-OtBu偶聯(lián)后；所得肽樹脂脫除保護基Fmoc后，在活化劑系統(tǒng)存在下與Pal-OH偶聯(lián)得

Boc-His(P_g2)-Ala-Glu(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(tBu)-Val-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Leu-Glu(tBu)-Gly-Gln(Trt)-Ala-Ala-Lys(N^α-Pal-γ-Glu-OtBu)-Glu(Resin)-OAll肽樹脂Ⅳ；

步驟6、肽樹脂Ⅳ在鈀催化體系下脫除保護基All后，在活化劑系統(tǒng)存在下與片段IV偶聯(lián)得

Boc-His(P_g2)-Ala-Glu(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(tBu)-Val-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Leu-Glu(tBu)-Gly-Gln(Trt)-Ala-Ala-Lys(N^α-Pal-γ-Glu-OtBu)-Glu(Resin)-Phe-Ile-Ala-Trp(Boc)-Leu-Val-Arg(pbf)-Gly-Arg(pbf)-Gly-OtBu利拉魯肽肽樹脂；

步驟7、在20℃以下，將利拉魯肽肽樹脂加入到十倍量的三氟乙酸體系的裂解液中，控制溫度20-30℃攪拌反應1-3小時；將所得反應體系過濾，濾液經(jīng)減壓濃縮后，再緩慢加入到0℃以下的醚類溶劑中，邊攪拌邊滴加；所得白色沉淀物經(jīng)離心分離和多次洗滌再離心分離，減壓干燥后即得利拉魯肽粗品。