[發明專利]一種制備高純度多肽或其類似物的方法

有效

• 申請號: 201711117190.5
• 申請日: 2017-11-13
• 公開（公告）號: CN108101959B
• 公開（公告）日: 2021-07-09
• 發明（設計）人: 李長兵;庹世川;楊燕蘋;薛宏祥;王利春;王晶翼
• 申請（專利權）人: 四川科倫藥物研究院有限公司
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C07K1/20
• 代理公司: 成都高遠知識產權代理事務所(普通合伙) 51222
• 代理人: 李高峽;張娟

本發明公開了一種制備高純度多肽或其類似物的方法，具體步驟如下：采用高效液相色譜法制備純化AMG416水溶液，收集目的峰餾分，其中，色譜條件為：固定相為C18，流動相A為磷酸鹽、甲酸鹽或者乙酸鹽水溶液，流動相B為甲醇或者乙腈，流動相A與流動相B的體積比為(80～100)：(0～20)。本發明方法可以高效分離純化AMG416，收率高，得到的產品純度高，工業應用前景非常好。

技術領域

本發明涉及一種制備高純度多肽或其類似物的方法。

背景技術

繼發性甲狀旁腺功能亢進(SHPT，簡稱繼發性甲旁亢)，是指在慢性腎功能不全、腎小管酸中毒、維生素D缺乏等情況下，甲狀旁腺長期受到低血鈣、低血鎂或高血磷的刺激而分泌過量的PTH的一種慢性代償性臨床表現，長期的甲狀旁腺增生最終導致形成功能自主的腺瘤。目前，治療繼發性甲狀旁腺功能亢進的常用藥物是安進公司(Amgen)生產的西那卡塞，其自十多年前上市以來增長相當穩定，2014年僅美國本土銷售額就高達到10億美元。

AMG416(又名vecalcetide、etelcalcetide)是安進公司開發的一種新的擬鈣劑(Calcimimetic agent)，其結構如下：

AMG416通過靜脈給藥，用于正接受血液透析治療的慢性腎臟病(CKD)患者。AMG416結合并激活對甲狀旁腺上的鈣敏感受體，從而實現甲狀旁腺激素(PTH)水平的降低，已完成的Ⅲ期臨床證實該藥療效確切，安全性良好，患者依從性更高，輕松擊敗了目前常用的藥物西那卡塞(Mimpara)。因此，如何高效制備純化得到高純度AMG416就顯得極為重要。

然而，由于AMG416極性較大而且不穩定，對其進行純化非常困難，采用一些常規的純化方法進行純化的收率非常低。CN201080045024、WO2015154031的專利申請中公開說明了AMG416可以使用反相高效液相(RP-HPLC)純化，但對具體制備用流動相體系、方法未做詳細說明。

發明內容

為了解決上述問題，本發明提供了一種制備高純度多肽或其類似物，尤其是制備高純度AMG416的方法。

本發明中，AMG416是指結構如下的多肽：

本發明涉及一種制備高純度多肽或其類似物的方法，其中包括：

步驟(1)：制備多肽或其類似物的水溶液，其中，多肽或其類似物為AMG416或其類似物

步驟(2)：采用色譜分離法制備純化多肽或其類似物水溶液，收集目的峰，合并后將溶液凍干或進一步操作，得到高純度多肽或其類似物精制品；

其中，色譜分離法的固定相為C18，流動相A為磷酸鹽水溶液、甲酸鹽水溶液或者乙酸鹽水溶液中的一種或多種，流動相B為甲醇或者乙腈中的一種或多種，流動相A與流動相B的體積比為(80～100)：(0～20)，其中流動相B不為零。

本發明所述的高純度多肽或其類似物制備方法中，流動相A選自磷酸鹽、甲酸鹽或者乙酸鹽水溶液中的一種或多種，流動相B選自甲醇或者乙腈中的一種或多種；

本發明所述的高純度多肽或其類似物制備方法中，流動相A與流動相B的體積比優選為(90～100)：(0～10)，其中流動相B不為零；進一步優選為(90～97)：(3～10)。

本發明中流動相A與流動相B的體積比為(80～100)：(0～20)，若流動相A與流動相B的體積比大于上述的范圍，則樣品可能會吸附在柱子上，無法洗脫下來；若流動相A與流動相B的體積比小于上述的范圍，則樣品保留時間過短，樣品存在被直接洗脫下來的風險，導致無法純化。因此，本發明中流動相A與流動相B的體積比為(80～100)：(0～20)是合適的，且優選為(90～100)：(0～10)，更優選為(90～97)：(3～10)。