[發明專利]一種促進骨髓間充質干細胞向神經元分化的誘導培養基和誘導方法

在審

• 申請號: 201711115769.8
• 申請日: 2017-11-13
• 公開（公告）號: CN107653227A
• 公開（公告）日: 2018-02-02
• 發明（設計）人: 胡小東;王健;趙翔;熊華強;宋彩霞;王仁杰;邱陽;黃啟程;李國焱;唐玲;葉勁濤;曹玉昊
• 申請（專利權）人: 重慶斯德姆生物技術有限公司
• 主分類號: C12N5/0793
• 分類號: C12N5/0793
• 代理公司: 重慶百潤洪知識產權代理有限公司50219
• 代理人: 高姜

1.一種促進骨髓間充質干細胞向神經元分化的誘導培養基，其特征在于，包括以下組分：人參皂苷Rg1 1-8mg/L、三七多糖0.3-0.8mg/L、維生素C 5-12mg/L、EGF 2-10μg/L、葡萄籽提取物2-5mg/L，神經元培養上清液補足。

2.根據權利要求1所述的促進骨髓間充質干細胞向神經元分化的誘導培養基，其特征在于，包括以下組分：人參皂苷Rg1 6mg/L、三七多糖0.5mg/L、維生素C 7mg/L、EGF 8μg/L、葡萄籽提取物4mg/L，神經元培養上清液補足。

3.根據權利要求1或2所述的促進骨髓間充質干細胞向神經元分化的誘導培養基，其特征在于，三七多糖通過以下方法制備得到：取提取過三七總皂苷的廢渣，加廢渣3-5倍重量的水，煮40-60min，過濾，得第一濾液和第一沉淀，向第一沉淀中加2-4倍重量的水，煮30-50min，過濾，得第二濾液和第二沉淀，然后再向第二次沉淀中加入2-3倍水，煮20-30min，過濾，得第三次濾液和第三次沉淀，合并三次濾液，旋轉濃縮總濾液至原體積的1/4-1/5，加入無水乙醇，邊加邊攪拌，放置，然后抽濾得沉淀，再用無水乙醇洗滌沉淀，最后烘干，得三七多糖。

4.根據權利要求1或2所述的促進骨髓間充質干細胞向神經元分化的誘導培養基，其特征在于，葡萄籽提取物通過以下方法制備得到：

(1)將葡萄籽粉碎，加入葡萄籽重量32-35％的水和0.03-0.08％的酵母，室溫下密封發酵10-12天，然后真空干燥至含水量≤7％；

(2)以無水乙醇為萃取劑，對步驟(1)所得物進行亞臨界萃取，萃取溫度為60-62℃，萃取壓力為3.8-4.0MPa，萃取時間為1-1.5h，得萃取物；

(3)將萃取物減壓濃縮至原體積的1/3-1/4，所得濃縮液以0.6-0.8V/h的流速過活性炭柱，然后用70％乙醇溶液洗脫，最后再濃縮干燥，得葡萄籽提取物。

5.根據權利要求1或2所述的促進骨髓間充質干細胞向神經元分化的誘導培養基，其特征在于，神經元培養上清液通過以下方法制備得到：神經元細胞在神經元培養基中培養3-5h，換液，繼續培養3-5天，得神經元培養上清液。

6.根據權利要求5所述的促進骨髓間充質干細胞向神經元分化的誘導培養基，其特征在于，神經元培養基為含有1-2％B27、0.5-1％青霉素、0.5-1％鏈霉素、0.2-0.4mM GLUTAMAX的神經元基礎培養基。

7.根據權利要求5所述的促進骨髓間充質干細胞向神經元分化的誘導培養基，其特征在于，神經元細胞的接種密度為3-8×10⁵個/mL，培養條件為37℃，5％CO₂。

8.一種骨髓間充質干細胞向神經元分化的誘導方法，其特征在于，將骨髓間充質干細胞與上述誘導培養基混合，培養。

9.根據權利要求8所述的骨髓間充質干細胞向神經元分化的誘導方法，其特征在于，培養條件為37℃，5％CO₂，培養時間為5-8天。

10.根據權利要求8所述的骨髓間充質干細胞向神經元分化的誘導方法，其特征在于，骨髓間充質干細胞的接種密度為2-8×10⁴個/mL。