[發明專利]用于多重PCR文庫構建的連接序列及其設計方法有效
| 申請號： | 201711111664.5 | 申請日： | 2017-11-13 |
| 公開（公告）號： | CN107988219B | 公開（公告）日： | 2018-11-02 |
| 發明（設計）人： | 糜慶豐;朱鵬遠;吳春求;黃銓飛;王楊;周幸芝;呂來灰 | 申請（專利權）人： | 東莞博奧木華基因科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/11 | 分類號： | C12N15/11;C12Q1/6811;C40B50/06 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 523808 廣東省東莞市松山湖高新技*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 連接序列 文庫構建 測序文庫 多重PCR 測序 構建 建庫 苯丙酮尿癥 候選序列集 遺傳性耳聾 安全用藥 靶向用藥 核酸測序 候選序列 擴增體系 目標片段 市場應用 通用性強 突變基因 致病基因 試劑盒 基因 乳腺癌 初篩 核酸 擴增 位點 文庫 肺癌 標簽 檢測 節約 應用 | ||
1.一種用于多重PCR文庫構建的連接序列，所述連接序列設置于目標片段特異性引物的5’端，構成連接引物；所述連接序列還設置于測序接頭的3’端，構成連接接頭；基于連接序列的設置，通過PCR擴增實現目標片段與測序接頭的連接，所述連接序列選自SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:6任意一條核苷酸序列。
2.根據權利要求1所述的用于多重PCR文庫構建的連接序列，其特征在于：所述連接序列還可設置于標簽的3’端，構成連接標簽，通過PCR擴增實現標簽、測序接頭、目標片段的連接。
3.根據權利要求1或2所述的用于多重PCR文庫構建的連接序列，其特征在于：所述連接序列用于Ion torrent測序平臺。
4.根據權利要求1或2所述的用于多重PCR文庫構建的連接序列，其特征在于：所述連接序列適用于人核酸測序文庫構建。
5.如權利要求1～4任一項所述的連接序列的設計方法，包括如下步驟：
獲取候選序列集：采用滑窗法構建人類遠源物種基因組核苷酸序列集N和人類基因組核苷酸序列集M，將序列集M中出現的序列從序列集N中剔除，獲得候選序列集；所述人類遠源物種選自
候選序列初篩：在候選序列集中，篩選滿足以下條件的序列：
（1）解鏈溫度為55～65℃的序列；
（2）不包含未知堿基的序列；
（3）與序列自身、測序接頭不形成二聚體的序列；
e-PCR復篩：將初篩獲得的序列對人類參考基因組進行e-PCR分析，篩選不生成模擬擴增產物的序列作為連接序列。
6.根據權利要求5所述的設計方法，其特征在于：獲取候選序列集時，滑窗法以15～20bp為窗口大小，1bp為步長，掃描相應的參考基因組。
7.根據權利要求5所述的設計方法，其特征在于：篩選與序列自身、測序接頭不形成二聚體的序列的方法為：利用primer軟件，將候選序列集中的各條序列分別與序列自身、測序接頭進行二聚體分析，剔除能夠形成二聚體的序列。
8.權利要求1～4任一項所述的連接序列、利用權利要求1～4任一項所述的連接序列構成的連接引物、連接接頭、連接標簽在人核酸測序文庫構建及制備人核酸測序試劑盒中的應用；其中，所述連接序列設置于目標片段特異性引物的5’端，構成連接引物；所述連接序列設置于測序接頭的3’端，構成連接接頭；所述連接序列設置于標簽的3’端，構成連接標簽。
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