[發明專利]一種氯羥吡啶有關物質的高效液相色譜檢測方法

有效

• 申請號: 201711110355.6
• 申請日: 2017-11-12
• 公開（公告）號: CN107907607B
• 公開（公告）日: 2020-09-11
• 發明（設計）人: 陳龍;趙云德;劉磊;黃正帥;孫浩
• 申請（專利權）人: 江蘇天和制藥有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 南京智造力知識產權代理有限公司 32382
• 代理人: 陳佳佳

本發明屬于藥物分析技術領域，具體涉及一種氯羥吡啶有關物質的高效液相色譜檢測方法；本發明采用的固定相為十八烷基鍵和硅膠，流動相為pH3.0?8.0的磷酸鹽緩沖液（或醋酸鹽或硼酸鹽）和甲醇（或乙腈或四氫呋喃）的混合液，柱溫為20?60℃，進樣5?50μL，流速0.5?2mL/min的條件下注入高效液相色譜儀，選擇在波長范圍為200?380nm內進行樣品的分析；本發明的檢測方法分離效率高、分析速度快、檢測靈敏性高，通過檢測氯羥吡啶中雜質的含量，控制氯羥吡啶的質量，更好的控制產品的穩定性和質量。

技術領域

本發明屬于藥物分析技術領域，具體涉及一種氯羥吡啶有關物質的高效液相色譜檢測方法。

背景技術

氯羥吡啶屬羥基吡啶類抗球蟲藥，在國內是使用最廣泛的抗球蟲藥之一，對各種雞球蟲均有效，通常混在動物飼料中連續用藥，國內氯羥吡啶產品主要有氯羥吡啶預混劑。

氯羥吡啶原料藥有關物質測定的現有技術僅有中國獸藥典標準，如下：

取本品0.10g，置10mL量瓶中，加甲醇約5mL，混勻，加氫氧化鈉溶液（1→50）2mL，超聲使完全溶解，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；精密量取適量，用甲醇定量稀釋制成每1mL中約含0.1mg的溶液，作為對照溶液。照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液5μL，點于硅膠G₂₅₄薄層板[以甲苯-甲醇-三乙胺（3:4:3）預展開，取出后晾干]上，以甲苯-甲醇-三乙胺（3:2:5）為展開劑，展開，晾干。吸取對照溶液5μL，點于同一薄層板上，再以甲苯-甲醇-三乙胺（3:4:3）為展開劑，展開，晾干，置紫外光燈（254nm）下檢視。供試品溶液如顯雜質斑點，不得多于1個，與對照溶液的主斑點比較，不得更深（1.0%）。

然而，現有薄層色譜技術在工藝研究和質量控制上存在顯著不足，現有薄層色譜技術專屬性差，雜質籠統的顯示為斑點，不利于工藝研究的開展，靈敏度差且不能雜質定量，標準限度1.0%證實了薄層色譜技術在有關物質控制上的粗放性和局限性。

綜上所述，現有技術在針對氯羥吡啶有關物質檢測方面存在顯著不足。因此，亟需提供一種全新的氯羥吡啶有關物質檢測方法，在保證各相關雜質與有效成分高效分離的基礎上，使其具有良好的專屬性，精密度和準確度，從而更好地實現對氯羥吡啶的工藝研究和質量控制，為生產工藝優化，擴大經濟效益，提供質量更優的產品提供可靠的檢測方法。

發明內容

本發明為了克服現有技術中存在的缺陷，提供一種氯羥吡啶有關物質的高效液相色譜檢測方法。

本發明提供了一種氯羥吡啶有關物質的高效液相色譜檢測方法，包括以下步驟：

（1）樣品配制：

取氯羥吡啶樣品適量，加堿液與有機相溶解，制成氯羥吡啶樣品的儲備溶液；流動相稀釋，配制成約含氯羥吡啶0.02-0.5mg/mL的供試品溶液。

因氯羥吡啶在有機相與水中均不溶解，只有加少許堿液才能使氯羥吡啶達到有關物質檢測所需的濃度，同時堿性不宜太強，以每毫升有機相含10mmol堿量最優。堿液太少樣品溶解度不夠，堿液過多液相圖譜溶劑峰過大及主峰面積不穩定。

當對已知雜質A的檢測時，需配置雜質A的檢測溶液。

雜質A溶液：取雜質A適量，用流動相溶解，稀釋成含雜質A約為0.4-10μg/mL的溶液。

雜質A為2,6-二甲基-4-羥基吡啶或其他雜質，2,6-二甲基-4-羥基吡啶是氯羥吡啶合成過程關鍵中間體，其結構式如下：

氯羥吡啶與已知雜質A的混合：取雜質A溶液適量與氯羥吡啶溶液適量置量瓶中，流動相稀釋，配制成含雜質A一定限度的溶液作為供試品溶液。