[發(fā)明專利]利用枯草芽孢桿菌制備D?阿洛酮糖差向異構(gòu)酶的方法

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• 申請日: 2017-11-10
• 公開（公告）號: CN107699556A
• 公開（公告）日: 2018-02-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 竇光朋;邵先豹;杜倩;王艷輝;李紅臣;魏巍
• 申請（專利權(quán)）人: 山東百龍創(chuàng)園生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12N9/90
• 分類號: C12N9/90;C12P19/24;C12P19/02;C12R1/125
• 代理公司: 濟(jì)南金迪知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司37219
• 代理人: 朱家富

1.枯草芽孢桿菌制備D-阿洛酮糖差向異構(gòu)酶的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于，組分如下，均為質(zhì)量百分比：

玉米漿粉3～8％，葡萄糖0.8～1.5％，萘乙酸0.08～0.12％，七水硫酸鎂0.015～0.025％，磷酸氫二銨0.01～0.02％，硫酸錳0.015～0.02％，硫酸銅0.015～0.018％，氯化鐵0.08～0.12％，余量水，pH6.8～7.2。

2.如權(quán)利要求1所述的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于，組分如下，均為質(zhì)量百分比：

玉米漿粉5％，葡萄糖1％，萘乙酸0.1％，七水硫酸鎂0.02％，磷酸氫二銨0.015％，硫酸錳0.018％，硫酸銅0.016％，氯化鐵0.1％，余量水，pH6.8～7.2。

3.利用枯草芽孢桿菌制備D-阿洛酮糖差向異構(gòu)酶的方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)取枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)BLCY-005，接種于種子培養(yǎng)基中，進(jìn)行種子培養(yǎng)，制得種子液；

(2)取步驟(1)制得的種子液，按照體積百分比1～2％的接種量接種于權(quán)利要求1所述的發(fā)酵培養(yǎng)基中，在溫度35～37℃、pH6.8～7.2，罐壓0.05Mpa，通風(fēng)比2.0vvm，轉(zhuǎn)速250～400rpm，溶氧30％～40％的條件下，發(fā)酵培養(yǎng)36h，制得發(fā)酵液；

(3)取步驟(2)制得的發(fā)酵液，經(jīng)離心分離、洗滌菌體，再經(jīng)干燥、粉碎，制得D-阿洛酮糖差向異構(gòu)酶干粉。

4.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述步驟(1)中，枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)BLCY-005來源于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號CGMCC No.13152。

5.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述步驟(1)中，種子培養(yǎng)基組分如下，均為重量百分比：

蛋白胨0.8～1.2％，玉米漿粉：0.4～0.6％，甘油：0.8～1.2％，余量水，pH6.8～7.0。

6.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述步驟(1)中，種子培養(yǎng)條件為：溫度35～37℃、220rpm震蕩培養(yǎng)8h。

7.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述步驟(3)中，洗滌為采用純凈水進(jìn)行洗滌。

8.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述步驟(3)中，干燥條件為：溫度-40～-45℃、壓力-80～-100kpa。

9.權(quán)利要求3所述方法制備的D-阿洛酮糖差向異構(gòu)酶在制備D-阿洛酮糖中的應(yīng)用。

10.如權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于，步驟如下：

(i)配制質(zhì)量百分比為25～35％的果糖溶液；

(ii)向步驟(i)中配制的果糖溶液中添加上述D-阿洛酮糖差向異構(gòu)酶干粉，添加量為每公斤果糖原料添加0.5～1.0gD-阿洛酮糖差向異構(gòu)酶干粉，在60℃反應(yīng)8～12小時，制得阿洛酮糖粗液；

(iii)將步驟(ii)制得的阿洛酮糖粗液經(jīng)脫色、離交、濃縮、色譜分離、濃縮后，制得阿洛酮糖。