[發明專利]一種藍莓的高效快速穩定基因轉化方法有效
| 申請號： | 201711105959.1 | 申請日： | 2017-11-10 |
| 公開（公告）號： | CN107653264B | 公開（公告）日： | 2021-03-23 |
| 發明（設計）人： | 宋楊;劉鳳之;張紅軍;王海波;劉紅弟 | 申請（專利權）人： | 中國農業科學院果樹研究所 |
| 主分類號： | C12N15/82 | 分類號： | C12N15/82;A01H5/00;A01H6/36 |
| 代理公司： | 西安銘澤知識產權代理事務所(普通合伙) 61223 | 代理人： | 李振瑞 |
| 地址： | 125100 遼寧*** | 國省代碼： | 遼寧;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 藍莓 高效 快速 穩定 基因 轉化 方法 | ||
1.一種藍莓的高效快速穩定基因轉化方法，其特征在于，包括以下步驟：
S1，外植體的準備：切取藍莓組織，浸泡于消毒液中除菌，無菌水清洗，瀝干水分，得到外植體，備用；
S2，農桿菌的準備：將含有目的基因的農桿菌擴繁培養至菌體濃度OD600＝0.4-0.8，培養溫度為28±1℃，得到農桿菌菌液，備用；
S3，一級共培養轉化：將無菌紗布浸泡于農桿菌菌液中10min，取出，瀝掉多余菌液，將外植體包裹于紗布內，28±1℃孵育12h；加入篩選培養基，150-220rpm、28±1℃暗室培養24-48h，得到一級轉化處理組織；
每升所述篩選培養基的配方如下：牛肉膏10g、酵母膏10g、氯化鈉5g、羧甲基纖維素1g、果膠1g、抗菌物質20-50mg，蒸餾水定容至1L，pH 7.0；
S4，誘導培養：將紗布內的一級轉化處理組織取出，無菌水清洗，置于誘導培養基中培養，28±1℃暗室培養1-3周，得到愈傷組織；
S5，二級共培養轉化：將愈傷組織浸泡于農桿菌菌液中，共培養24-48h，得到二級轉化處理組織；
S6，轉基因植株的培養篩選：將所述二級轉化處理組織置于分化篩選培養基中，培養至長出幼苗，得到含有目的基因的轉化藍莓植株；
所述分化篩選培養基由以下比例的組分混合而成：MS基本培養基:黃原膠:抗菌物質＝1L:5-10g:20-50mg。
2.根據權利要求1所述的藍莓的高效快速穩定基因轉化方法，其特征在于，S1中，所述消毒液為0.5-1.5g/100ml的次氯酸鈉溶液或者體積分數70％乙醇溶液；浸泡時間為20min。
3.根據權利要求1所述的藍莓的高效快速穩定基因轉化方法，其特征在于，S1中，所述藍莓組織為藍莓幼嫩莖或者藍莓嫩葉。
4.根據權利要求1所述的藍莓的高效快速穩定基因轉化方法，其特征在于，S2中，所述農桿菌為LBA4404、EHA105或者GV3101。
5.根據權利要求4所述的藍莓的高效快速穩定基因轉化方法，其特征在于，S2中，農桿菌擴繁培養采用的培養基配方為：牛肉膏10g、酵母膏10g、氯化鈉5g、羧甲基纖維素1g、果膠1g，蒸餾水定容至1L，pH 7.0。
6.根據權利要求1所述的藍莓的高效快速穩定基因轉化方法，其特征在于，S3和S6中，所述抗菌物質為卡那霉素、鏈霉素或者頭孢霉素，并且S3和S6中采用不同的抗菌物質。
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